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革蘭氏染色配制及染色方法實(shí)驗(yàn)步驟

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-08-28
核心提示: 實(shí)驗(yàn)方法原理:本染色法是最基本的染色法,可使用于標(biāo)本涂片或菌落涂片。染色結(jié)果將細(xì)菌分為革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性兩類。
 實(shí)驗(yàn)方法原理:本染色法是最基本的染色法,可使用于標(biāo)本涂片或菌落涂片。染色結(jié)果將細(xì)菌分為革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性兩類。

 

實(shí)驗(yàn)步驟

一、實(shí)驗(yàn)試劑

1.結(jié)晶紫溶液:

A液:結(jié)晶紫:2g,95%乙醇:20ml。

B液:草酸銨:0.8g,蒸餾水:80ml。

需在用前24小時(shí)將A液.B液混合,過(guò)濾后裝入試劑瓶?jī)?nèi)備用。

2.碘液

碘:1g,碘化鉀:2g蒸餾水:300ml。

出碘與碘化鉀混合并研磨,加入幾毫升水,使其逐漸溶解,然后研磨,繼續(xù)加入少量蒸餾水至完全溶解,最后補(bǔ)足水量。

也可用少量蒸餾水,先將碘化鉀完全溶解,再加入碘片,待完全溶解后,加水至300ml。

3.脫色液:95%乙醇。

4.復(fù)染液:

A.貯存液:沙黃:2.5g,95%乙醇:100ml。

B.應(yīng)用被:A液:10ml,蒸餾水:90ml。

菌片制備:染色的第一步是制作涂片。菌液涂片時(shí),用接種環(huán)蘸取菌液點(diǎn)在載玻片上,標(biāo)本可直接在玻片上涂布,菌落涂片時(shí),先取生理鹽水1滴,置玻片上,用接種針挑去菌落,在鹽水中涂布。涂片時(shí)必須注意應(yīng)輕輕操作。猛烈的動(dòng)作會(huì)改變菌細(xì)胞原有的排列形式,或造成細(xì)菌鞭毛脫落,影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。制備的涂片應(yīng)自然干燥,并經(jīng)火焰固定,固定溫度不易過(guò)高,以玻片背面接觸手背不燙為準(zhǔn),否則可能使細(xì)胞形態(tài)改變。將固定后的涂片進(jìn)行染色。

二、染色方法

1.涂片經(jīng)火焰固定,加結(jié)晶紫液染1min,清水沖去染液。

2.加碘液染1min,水洗。

3.加脫色液,不時(shí)搖動(dòng)約30秒,至無(wú)紫色脫落為止,水洗。

4.加復(fù)雜液,染30秒,水洗。

5.干后鏡檢。

編輯:songjiajie2010

 
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