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關于生物實驗當中的標準曲線常見問題解答

放大字體  縮小字體 發布日期:2024-10-21
核心提示:標準曲線的制作中,會有這樣那樣的問題,比如常有人問:一定要做5個點?線性相關系數R值必須幾個9才達標?標曲是每天都做還

標準曲線的制作中,會有這樣那樣的問題,比如常有人問:一定要做5個點?線性相關系數R值必須幾個9才達標?標曲是每天都做還是每次都做?標曲是否必須通過原點?……


1、標準曲線的制作依據?


GB/T22554-2010《基于標準樣品的線性校準》中:

1)標準曲線的濃度范圍應覆蓋正常操作條件下的被測量范圍;

2)標準樣品的組分盡量與被測樣品組分一致;

3)標準樣品的濃度值應等距離的分布在被測量范圍;

4)標準樣品的個數至少應有3個濃度;

5)每個標準點至少重復2次,這個重復是指從稀釋開始;如果國家標準有相應的濃度系列推薦,盡量按國家標準。工作中我們經常采用線性校準,因為線性方程最為簡潔。


2、什么是校準曲線?


校準曲線包括標準曲線和工作曲線,前者用標準溶液系列直接測量,沒有經過預處理過程,這對于樣品往往造成較大誤差;而后者所使用的標準溶液經過了與樣品相同的消解、凈化、測量等全過程。



3、首先標曲要做幾個點?


3個點:對于一些低濃度,特別是微量分析,并且濃度范圍不是很大的,檢測器響應可靠,背景干擾非常小的,則可以選用較少的工作點就行,一般有3個濃度點就足夠了,有些甚至可以只用一個濃度點就行,另一個點直接用坐標原點。

 

4~6個點:對于平時測量的樣品濃度范圍較寬,并且檢測器響應不完全是一次曲線(直線)的,可以采用二次曲線或分段校正方式,以減少數據偏差,這種情況就需要多用幾個數據點,如果不分段,數據點有4~6個就夠用。



4、標曲R值是幾個9才合格?


實驗室應按檢測標準(方法)的要求使用標準溶液或標準物質建立標準曲線。所用標準溶液或標準物質應覆蓋被測樣品的濃度范圍。檢測標準(方法)如無具體的要求,至少使用5個標樣(除空白外)建立線性標準曲線,每個點重復測定1-3次,對于篩選方法,線性回歸方程的相關系數不應低于0.98,對于確證方法,相關系數不應低于0.99。其實,大于0.99是判斷是否為線性相關的一個標準,實際應用中線性大于0.999才是比較理想的。線性在0.99到0.999之間的監測結果只用接近最高濃度一半(中間濃度)的位置才比較準確,如果線性大于0.999的話,在整個線性范圍內都會有一個比較滿意的結果。

如果檢測的線性不好,可以減少標準的覆蓋范圍,將標準的濃度調整到待測樣品濃度附近,這樣結果也是非常準確的。


5、標準曲線有效期的規定?


(1)標準曲線屬于實驗室質量控制的范圍,按照《實驗室資質認定評審準則》中結果控制的要求:

定期使用有證標準物質(參考物質)進行監控和/或使用次級標準物質(參考物質)開展內部質量控制。

(2)準則中并未對“定期”進行規定,所以如果“定期”,就根據實驗室的實際情況來定了。

(3)既然準則上沒說明,那根據一般的分析教材,當實驗條件(包括藥劑、人員、儀器等)發生變化時,最好重新制作標準曲線。一般來說儀器如果長期使用,并經過檢定,是處于穩定狀態,而人員藥劑的變化往往會較大。如果說每次換個人操作都要換曲線,那工作量就太大了。


6、每次開機都必須做標準曲線?


從藥品檢測的要求來說,因為:

1、每天所配的流動相都會有所不同,導致出峰的時間都會有一定的差異,峰面積相應都有所差異。

2、檢測器光能也在不斷的衰弱,因此其每天的相應值也有所不同,其峰面積也有差異。基于以上原因,原則上應該是每天都要進行標準曲線校正的。標準曲線不要每次都做,但是每次必須進標準品樣品;因為每次你的流動相和原來的不可能完全一樣,同時儀器的狀態也在變化,所以不同批次間的保留時間是不一致的,所以你必須用隨行標準品來定位與定量。


7、校準曲線能不能長期使用?


不能長期使用,可以短期使用,使用前做一個單點重校,測試一個零點和中間點,測出一個糾正過的曲線。


8、標準曲線是否必須過原點?


看要求,如果零點的有效值是小數點后面第四位才有數字不影響測試,超過0.001就不行了。


9、標準曲線的線性范圍?


最高點一定要大于被測試樣品(物質)10%。


10、相關系數的有效數字?


至少二位以上。


11、Y=bX和二次曲線的選用?


看標準要求,以國標或行業標準為依據。測試范圍窄的建議使用一次線性方程,測試范圍寬點使用非線性或二次方程。


12、校準曲線的斜率、截距保留幾位有效數字?


1、參考依據,參考標準HJ 630,其他行業參考使用。

2、相關系數R保留的有效數字,校準曲線相關系數只舍不入,保留到小數點后第一個非9數字。如果小數點后多于4個9,最多保留4位。

3、校準曲線斜率的有效位數,校準曲線斜率的有效位數,應與自變量的有效數字位數相等。

4、校準曲線截距的有效位數,校準曲線截距的最后一位數,應與因變量的最后一位數取齊。

5、自變量和因變量的有效數字,記錄測定數值時,應同時考慮計量器具的精密度、準確度和讀數誤差。對檢定合格的計量器具,有效數字位數可以記錄到最小分度值,最多保留一位不確定數字。


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編輯:songjiajie2010

 
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