亦稱礦物油保藏法,定期移植保藏法的輔助方法。是指將菌種接種在適宜的斜面培養基上,最適條件下培養至菌種長出健壯菌落后注入滅菌的液體石蠟,使其覆蓋整個斜面,再直立放置于低溫(4~6℃)干燥處進行保存的一種菌種保藏方法。
操作步驟如下:
1 液體石蠟的準備
選用優質化學純液體石蠟,將液體石蠟分裝加塞,用牛皮紙包好,采用以下兩種方式進行滅菌:
121℃濕熱滅菌30min,置40℃恒溫箱中蒸發水分,經無菌檢查后備用。
160℃干熱滅菌2個小時,冷卻后,經無菌檢查后備用。
2 斜面培養物的制備 參照定期移植法。
3 灌注石蠟 將無菌的液體石蠟在無菌條件下注入培養好的新鮮斜面培養物上,液面高出斜面頂部1cm左右,使菌體與空氣隔絕。
4 保藏
4.1 注入液體石蠟的菌種斜面以直立狀態置低溫(4~6℃)干燥處保藏,保藏時間2~10年。
4.2 保藏期間應定期檢查,如培養基露出液面,應及時補充無菌的液體石蠟。
5 恢復培養 恢復培養時,挑取少量菌體轉接在適宜的新鮮培養基上,生長繁殖后,再重新轉接一次。