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動物細胞融合

放大字體  縮小字體 發布日期:2013-08-28  來源:實驗室資訊網
核心提示:動物細胞融合細胞融合是指兩個或兩個以上的細胞合并成為一個細胞的過程。在自然情況下,體內和體外培養的細胞均能發生自發融合現
 動物細胞融合
 
細胞融合是指兩個或兩個以上的細胞合并成為一個細胞的過程。在自然情況下,體內和體外培養的細胞均能發生自發融合現象。人工方法誘導細胞融合開始于50 年,現在這項技術已成為研究細胞遺傳、細胞免疫,腫瘤及細胞工程的重要手段。在誘導物(如仙臺病毒,聚乙二醇)作用下,相互融合的細胞發生凝集,隨后在質膜接觸處發生質膜成份的一系列變化,主要是某些化學鍵的斷裂與重排,最后打通兩質膜,形成雙核或多核細胞(此時稱同核體或異核體)。通過有絲分裂,細胞核便發生融合,形成雜種細胞。
 
實驗內容及方法
1. 用注射器取2ml Alsver 液,再從翼下靜脈取雞血2ml,注入試管內,再加6ml Alsver 液,混勻后置4℃冰箱中可備作3—4 天用。
2. 實驗時取“1”液1ml 于離心管中,加入4ml 0.85%的NaCl 液,混勻平衡后以1200r/min離心5 分鐘。
3. 去上清液。再重復“2”兩次,最后一次離心10 分鐘。
4. 在沉降血球中加入1mlGKN 液,混勻使之成為細胞懸液。(可加GKN 液調節稀釋使每立方毫米含紅細胞3~4 萬個)。
5. 在“4”液中加入6—8 滴(約0.5ml)50%的PEG 液,迅速混勻,常溫下2~3min 滴片鏡檢。觀察時注意不同程度的融合現象。通常分為五個階段。①兩細胞膜接觸,粘連;②細胞膜形成穿孔;③兩細胞的細胞質連通;④通道擴大,兩細胞連成一體;⑤細胞完全合并,形成一個含有兩個或多個核的圓形細胞。
6. 計算融合率。
 
實驗用品
1. 器具 顯微鏡 離心機 天平 離心管 注射器 細滴管 載片、蓋片
2. 試劑 50%聚乙二醇(PEG):稱取一定量的PEG(MW=4000)放入刻度試管,在酒精燈火或沸水中加熱溶化。待冷至50℃時,加入等體積并預熱至50℃的GKN 液混勻。
Alsver 液:葡萄糖2.05g 檸檬酸鈉0.8g NaCl 0.42g,加重蒸水至100ml。
GKN 液:NaCl 8g,KCl 0.4g,Na2HPO4·2H2O 1.77g,NaH2PO·2H2O 0.69g,葡萄糖2g,酚紅0.01g,溶于1000ml 重蒸水中。
0.85%NaCl 液
3. 材料 一齡公雞靜脈血
 
編輯:songjiajie2010

 
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