一、劃不出單個菌落怎么辦？

（1）平板上有過多的水分；

（2）劃線時接種環(huán)未經(jīng)反復(fù)灼燒。

（3）多區(qū)劃線，三區(qū)或四區(qū)劃線。

二、培養(yǎng)基配制時應(yīng)注意的問題：

（1）滅菌溫度要嚴格控制，按照要求滅菌，尤其含糖量較高的培養(yǎng)基溫度不應(yīng)太高，過高會導(dǎo)致糖分焦化，影響質(zhì)量。

（2）瓊脂培養(yǎng)基不能反復(fù)溶化。反復(fù)溶化會破壞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分。

（3）培養(yǎng)基不能反復(fù)滅菌，反復(fù)滅菌也會導(dǎo)致營養(yǎng)成分的破壞。

（4）含瓊脂的培養(yǎng)基滅菌后，要搖勻。

三、平板的保存：大多數(shù)平板如VRBA、DC、、尿素酶生化管、顯色系列等要避光低溫保存。

四、產(chǎn)品的保存：

（1）干粉培養(yǎng)基：避光干燥，結(jié)塊后不能使用。

（2）亞碲酸鉀卵黃增菌液、50%卵黃乳液等：冷凍保存，使用時，要常溫解凍，避免水浴加熱。

（3）抗生素類：冷藏保存，溫度過高會導(dǎo)致靈敏度的下降。

（4）兔血漿：冷藏保存少量的紅色不會影響結(jié)果。

五、觀察時間的掌握：按SN、GB等標準或培養(yǎng)基的使用說明所述時間進行觀察，時間過短或時間過長，單菌落的特征都不會很明顯。如單增李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基，時間短單菌落看不到卵磷脂環(huán)，時間長綿羊李氏菌也會產(chǎn)生沉淀環(huán)。OXA、PALCAM的觀察也如此，時間過長，李氏菌使整個平板成黑色，不利于觀察單個菌落。

六、添加劑的添加：

（1）溫度的掌握。卵黃和抗生素類添加的溫度都不應(yīng)太高。

（2）定量。過多會抑制一些目標菌，太少又導(dǎo)致雜菌的過度生長。

七、培養(yǎng)溫度的掌握：

（1）真菌類。25-28℃培養(yǎng)

（2）細菌類。李氏菌在增菌和生化中要求培養(yǎng)溫度在30℃左右。

（3）其他一般在36℃左右

八、接種方法：常用的方法主要有劃線、三點接種、穿刺接種、傾注接種、涂布接種、液體接種。

九、革蘭氏染色方法：染色時間的掌握、沖洗的方法。

十、生化實驗：

（1）接種的方法

（2）氧化型和發(fā)酵型實驗操作

（3）陽性菌種的對照

（4）接種前的純化。挑取單個菌落進行一系列的生化。

十一、關(guān)于殺菌的幾個概念：

（1）抑制：是在亞抑制劑量因子作用下導(dǎo)致微生物生長停止，但在移去這些因子后生長仍可以恢復(fù)的生物學(xué)現(xiàn)象。

（2）死亡：在致死劑量因子的作用下或在亞致死劑量因子長時間的作用下，導(dǎo)致微生物生長能力不可逆喪失，即使移去這種因子后生長仍不能恢復(fù)的生物學(xué)現(xiàn)象。

（3）防腐：在某些化學(xué)物質(zhì)或物理因子作用下，能防止或抑制微生物生長的一種措施，它能防止食物腐敗或防止食物霉變。

（4）消毒：利用某種方法殺死或滅活物質(zhì)或物體中所有病原微生物的一種措施，它可以起到防止感染和傳播的作用。

（5）滅菌：利用某種方法殺死物體中包括芽孢在內(nèi)的所有病原微生物的一種措施。

（6）化療：利用具有選擇毒性的化學(xué)物質(zhì)，例磺胺、抗生素等對生物體內(nèi)部被微生物感染的組織或病變細胞進行治療，以殺死組織內(nèi)的病原微生物或病變細胞，但對有機體無毒害作用的治療措施。