試驗過程中,生物樣本可能是最敏感的,因為它們的活性和特性依賴于合適的試驗操作和貯藏條件。實驗室菌種的處理和保藏的程序應(yīng)標準化,使盡可能減少菌種污染和生長特性的改變。按統(tǒng)一操作程序制備的菌株是微生物試驗結(jié)果一致性的重要保證。(對于菌株的驗收,復(fù)蘇傳代,使用,必須有規(guī)范化的程序,以保證菌株的標準特性)
微生物檢驗用的試驗菌應(yīng)來自認可的國內(nèi)或國外菌種收藏機構(gòu)的標準菌株,或使用與標準菌株所有相關(guān)特性等效的商業(yè)派生菌株。(一般是ATCC國內(nèi)也有CMCC,食品相關(guān)的CICC的菌株也可以。)
標準菌株的復(fù)活或培養(yǎng)物的制備應(yīng)按供應(yīng)商提供的說明或按已驗證的方法進行。從國內(nèi)或國外菌種收藏機構(gòu)獲得的標準菌株經(jīng)過復(fù)活并在適宜的培養(yǎng)基中生長后,即為標準儲備菌株。標準儲備菌株應(yīng)進行純度和特性確認。標準儲備菌株保存時,可將培養(yǎng)物等份懸浮于抗冷凍的培養(yǎng)基中,并分裝于小瓶中,建議采用低溫冷凍干燥,液氮儲存,超低溫冷凍(低于-30℃)等方法保存。低于-70℃或低溫冷凍干燥方法可以延長菌種保存時間。標準儲備菌株可用于制備每月或每周一次轉(zhuǎn)種的工作菌株。冷凍菌種一旦解凍轉(zhuǎn)種制備工作菌株后,不得重新冷凍和再次使用。
工作菌株的傳代次數(shù)應(yīng)嚴格控制,不得超過 5 代(從菌種收藏機構(gòu)獲得的標準菌株為第 0 代),以防止過度的傳代增加表型變化的風(fēng)險。1代是指將活的培養(yǎng)物接種到微生物生長的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng),任何亞培養(yǎng)的形式均被認為是轉(zhuǎn)種或傳代一次。必要時,實驗室應(yīng)對工作菌株的特性和純度進行確認。
工作菌株不可代替標準菌株,標準菌株的商業(yè)衍生物僅可用作工作菌株。
在這里有些概念需要理順:
標準菌株,這里指的是凍干菌粉。
儲備菌株:復(fù)蘇后的1代培養(yǎng)物。
工作菌株:由儲備菌株轉(zhuǎn)種傳代而來。
實驗室必須建立和保存其所有菌種的進出、收集、貯藏、保存、確認試驗以及銷毀的記錄(有了程序,就應(yīng)該有配套的記錄),應(yīng)有文件化的程序管理菌種(從標準菌株到工作菌株),該程序包括:標準菌種的申購記錄;從標準菌株到工作菌株操作及記錄;菌種必須定期轉(zhuǎn)種傳代,并做純度、特性等實驗室所需關(guān)鍵診斷指標的確認,并記錄;每支菌種都應(yīng)適當(dāng)標注,注明其名稱、標準號、接種日期、所傳代數(shù);菌種生長的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件;菌種保存的位置和條件;其它需要的程序。
標準菌株復(fù)活
1、安瓿bai瓶裝微生物菌種開封
1-1、用浸過70%酒精的du脫脂棉擦凈安瓿瓶。
1-2、用火焰將安瓿瓶口加熱滅菌。
1-3、用鑷子將鋁封口撕開。
2、菌株恢復(fù)培養(yǎng)
2-1、用無菌吸管,吸取0.3-0.4ml適宜的液體培養(yǎng)基,滴入安瓿管內(nèi),輕輕振 蕩,使凍干菌體溶解呈懸浮狀。
2-2、取約0.2ml菌體懸浮液,移植于指定的瓊脂斜面培養(yǎng)基上,剩余的菌液,注入指定的液體培養(yǎng)基內(nèi)(3-4mL),然后在建議的溫度下培養(yǎng)。
三、注意事項
3-1、菌種活化前,請將安瓿瓶保存在5-10℃的環(huán)境下。
3-2、厭氧菌的培養(yǎng),如無特別說明,自開封至接種完成,均需以無氧氣體充填,以保持厭氧狀態(tài)。
3-3、某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后,延遲期較長,需連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長。
儲備菌株
工作菌株