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革蘭氏染色技巧

放大字體  縮小字體 發布日期:2020-08-17
核心提示:何為革蘭氏染色:革蘭氏染色是細菌鑒別染色方法中最常使用的,染色結果可區分革蘭氏陽性菌及陰性菌,是鑒定細菌最重要的分類依據
 何為革蘭氏染色:

革蘭氏染色是細菌鑒別染色方法中最常使用的,染色結果可區分革蘭氏陽性菌及陰性菌,是鑒定細菌最重要的分類依據之一。


染色有4種試劑

 

初染劑:結晶紫,步驟中最先使用的試劑,把細菌染成藍紫色。

媒染劑:革蘭氏碘液,可與初染劑結合,形成結晶紫及碘復合物(CV-I),加強染料顏色的固定。

脫色劑:95%乙醇,因陽性菌與陰性菌細胞壁構造不同,而有不同的脫色反應。

復染劑:番紅,被上述步驟脫色的細菌,就會被這此試劑染成紅色。


革蘭氏染色原理:

革蘭氏染色法是由丹麥微生物學家漢斯-克理斯蒂安-革蘭(Hans Christian Gram)于1884年發明,至今仍為鑒別細菌之最重要方法。依據革蘭氏染色法可將細菌分為革蘭氏陽性以及革蘭氏陰性兩類。其染色原理推測與此兩類細菌之細胞壁結構有重大關系。


說法有二

其一為:革蘭氏陰性細菌的細胞壁含脂量高,酒精脫色時會將部份脂質萃取出來,而使細胞壁結構松動,通透性增加,故結晶紫-碘復合體(CV-I)被帶出細菌體外而無色。革蘭氏陽性細菌的細胞壁幾乎不含脂質,酒精甚至會使細胞壁脫水,故結構更加致密,結晶紫-碘復合體就被留在細菌體內。

其二為:酒精處理時,會使細菌的細胞壁肽聚醣(peptidoglycan)空隙縮小。革蘭氏陽性細菌之細胞壁肽聚醣較厚,而革蘭氏陰性細菌較薄,所以造成結晶紫-碘復合體離開革蘭氏陰性細菌的機會較大。故以酒精脫色后,取用紅色的番紅進行復染,此時無色的革蘭氏陰性細菌就會變成粉紅色,而原本已染上藍色的革蘭氏陽性細菌就會變成紫色。


革蘭氏染色注意事項:

不論何種染色法,最基本都要先熟習抹片的制作,抹片應厚薄適中,且宜勻而薄,細菌量不宜太多

染色時,脫色步驟可影響結果正確與否,脫色過度會使初染劑流失,使革蘭氏陽性細菌變為革蘭氏陰性細菌的顏色:但脫色不足,則無法完全去除CV-I復合物,結果使革蘭氏陰性細菌呈現革蘭氏陽性細菌的顏色。此步驟非常需要經驗的累積。

每種染劑之間,以蒸餾水或無菌水充分清洗,以除去剩余的染液。

宜使用18-24小時培養的新鮮菌落,因老化的細菌易失去保留初染劑的能力,而顯示出錯誤的結果,可能部分染成紅色,部分呈紫色。

建議每次染色時,可以帶品管玻片一起染色,確定染色時間及步驟正確。


編輯:songjiajie2010

 
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