轉眼間,(2016版)4789系列標準(除了GB 4789.2-2022 菌落總數測定)已經實施近6個年頭啦,雖然還有一個GB/T 4789.3-2003頑強的存在著。今天和大家在一起聊聊我對4789系列國標(常規微生物方面)的理解,純屬個人+他人觀點,如有雷同,那就對了!
首先來談一下總則GB 4789.1,很多小伙伴“一入坑”就上手菌落總數、大腸菌群等衛生指標菌的檢測,而忽視了這些檢驗的基礎及原則,經常會有微信群好友問“n、c、m、M是什么意思”類似的問題,也看得到群里的大佬們的悉心解答,總感覺我們解答的人比他們自己都要急切地讓他們明白。
《GB 4789.1-2016 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 總則》 理解
總則正文第一句話,“本標準規定了食品微生物學檢驗基本原則和要求”,已經很明確的告訴我們檢驗基本原則和要求就在這,你們快來看吧!然后標準從基本要求、樣品采集、檢驗、生物安全和質量控制、記錄與報告、檢樣后處理幾個方面展開了詳細的內容。基本要求即為“人、機、料、法、環”五大要素,也是實驗室質量控制的切入點。
樣品采集中規定了采樣方案,目前大多數產品標準也都規定選取三級采樣方案,為什么采取n、c、m等值呢,這是在跟國際接軌呀,雖然說三級采樣使得化驗員工作量增加了,但是要求更嚴格,企業為了更好的質量更規范的生產,也從另一反面增加了食品安全系數。然后就是檢驗過程,對應一系列的檢驗標準啦。
標準最后規定了“剩余樣品和同批產品不進行微生物項目的復檢”,為什么呢,微生物的分部可謂極不規則,即使是同一樣品的不同部位,也無法保證它微生物檢驗的重復性,更何況是不同的樣品呢,故而即使復檢,所得結果也不具有參考價值。
《GB 4789.2-2016 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數測定》理解
然后來看GB 4789.2,作為大多數產品的衛生指示菌,菌落總數的測定相信是很多新手的“第一道菜”。除了總則規定的基本要求外,此標準規定了檢驗程序,檢驗設備,計數方法和報告方式等。
檢驗程序估計大家都能倒背如流了,就不多贅述了,主要說說個人對這幾點的理解。制備梯度稀釋液時,磷酸鹽緩沖液可以更好得調節樣液的pH,減少樣液pH的不穩定帶來的影響。
然后是培養,一般要求實驗開始到傾注平板在15min內進行,可有效減少污染;還有,如果某個產品做出來總是有菌落蔓延的情況,那么可以采用二次覆蓋法來避免此類情況。
最后,計數和報告,規定選取菌落數在30-300之間的平板進行計數,例如,10倍和100倍稀釋度平板菌落數分別為271,283,25,34,結果計算式為(271+283+34)/【(2+0.1*1)*10-1】。報告方式,微生物檢驗均采取“四舍五入”的修約規則,小于100時,以整數報告,大于100時以科學計數法保留兩位有效數字,或修約后取前兩位,其余以0代替。
《GB4789.3-2016 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 大腸菌群計數》 理解
接著來看同為衛生指標菌——大腸菌群的檢測GB4789.3,在以往的MPN法外又增加了平板計數法,由于公司產品大多采用平板計數法,所以探討下平板計數及證實試驗的細節。
梯度稀釋,同菌落總數,傾注VRBA培養后續觀察菌落特征進行證實試驗,BGLB肉湯管產氣即可報告為陽性,一般伴隨產氣,還會有沉淀、液面有漂浮小氣泡的現象。
關于接種挑菌的說法,參加過多次培訓,也是各執己見,分享下比較認可的其中一種:分別計數某稀釋度2個平皿的典型菌落和可疑菌落數,每個平皿都挑取10個菌進行接種,10個菌的選取按典型和可疑菌落的比例進行,如典型:可疑為21:46,則挑取比例為:3:7。復發酵后分別計算兩個平皿的結果,再求取平均值作為該稀釋度的大腸菌群報告值。