2.1金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養物置于TSA上或TSB中，30-35℃，培養18-24h。

2.2生孢梭菌的新鮮培養物置于FTM中，30-35℃，培養18-24h。

2.3白色念珠菌的新鮮培養物置于SDA上，20-25℃，培養2-3天。

2.4黑曲霉菌的新鮮培養物置于SDA上，20-25℃，培養5-7天，或直到活的豐富的孢子，用0.05%聚山梨酯的PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉將孢子洗脫，然后，吸出孢子懸液至無菌試管內，用0.05%聚山梨酯的PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉制成適宜濃度的菌懸液。

2.5菌液制備后若在室溫下放置，應在2小時內使用；若保存在2～8℃，可在24小時內使用。生孢梭菌孢子懸液可替代新鮮的菌懸液，孢子懸液可保存在2～8℃，在驗證過的貯存期內使用。

為確認試驗條件是否符合要求，應進行陰性對照試驗，陰性對照試驗應無菌生長。如陰性對照有菌生長，應進行偏差調查。