紫外可見分光光度分析的定量依據(jù)是光吸收定律，但具體操作方法卻有多種

4.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線法
即工作曲線法，適用于大量重復(fù)的樣品分析，是工廠控制分析中應(yīng)用最多的方法。
根據(jù)光吸收定律，對于一種有色化合物，ε是一個定值，若把光程L也固定，那么吸光度A就和溶液的濃度c成正比，也就是說吸光度A和濃度c呈線性關(guān)系。
配制一系列適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，顯色后分別測定其吸光度，把吸光度A對濃度c作圖，即得工作曲線。

4.2.2 直接比較法

直接比較法其實質(zhì)也是工作曲線法，是一種簡化的工作曲線法。
配一個已知被測組分濃度為cs的標(biāo)樣，測其吸光度為As，在同樣條件下再測未知樣品的吸光度為Ax，通過計算可求出未知樣品的濃度cx。
As=εcsL
Ax=εcxL
由于溶液性質(zhì)相同，比色皿厚度一樣，所以As/Ax=cs/cx
式中：
cs-已知被測組分的濃度，mol/L；
cx-未知樣品的濃度，mol/L；
As-已知被測組分的吸光度；
Ax-未知樣品的吸光度。
直接比較法簡化了繪制工作曲線的步驟，適用于個別樣品的測定。
操作時應(yīng)注意配制標(biāo)樣的濃度要接近被測樣品的濃度，這樣能減少測量誤差。

4.2.3 標(biāo)準(zhǔn)加入法

標(biāo)準(zhǔn)加入法是工作曲線的一種特殊應(yīng)用。
選擇適當(dāng)?shù)娘@色條件，先測定濃度為cx的未知樣品吸光度為Ax，再向未知樣品中加入一定量的標(biāo)樣，配置成濃度為cx+Δc1、cx+Δc2……一系列樣品，分別顯色后再測定吸光度為A1、A2……最后在坐標(biāo)紙上繪圖，以吸光度A為縱坐標(biāo)，以濃度c為橫坐標(biāo)，分別畫出Δc1、Δc2所對應(yīng)的A1、A2等各點，連成直線后延長，與橫軸的交點cx也就是未知樣品的濃度cs。
應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)加入法時要注意，加入的標(biāo)樣濃度要適當(dāng)，使畫出的曲線保持適當(dāng)角度，濃度過大或過小都會帶來測量誤差。
這種方法操作比較麻煩，不適于作系列樣品分析，但它適用于組成比較復(fù)雜，干擾因素較多而又不太清楚的樣品，因為它能消除背景的影響。