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金黃色葡萄球菌的檢驗

放大字體  縮小字體 發布日期:2010-06-21
核心提示:  食品伙伴網注:本方法源自奶牛乳房炎防治技術指南(試行)(農醫發[20l0]29號)  1主要試劑和試驗方法:  1.1革蘭氏染

  食品伙伴網注:本方法源自奶牛乳房炎防治技術指南(試行)(農醫發[20l0]29號)

  1主要試劑和試驗方法:

  1.1革蘭氏染色:

  1.1.1涂片、火焰固定。

  1.1.2草酸銨結晶紫染1min。

  草酸銨結晶紫染液的配制:

  溶液A:結晶紫2g,95%酒精20mL,溶液B:草酸銨0.8g,蒸餾水80mL。將A、B溶液混合,用濾紙過濾后即可使用。

  1.1.3自來水沖洗。

  1.1.4加碘液覆蓋涂面染約1min。

  1.1.5水洗,用吸水紙吸去水分。

  1.1.6加95%酒精數滴,并輕輕搖動進行脫色,20s后水洗,吸去水分。

  1.1.7沙黃液(稀)染2min后,自來水沖洗。干燥,鏡檢。

  革蘭氏陽性菌染色為藍色,革蘭氏陰性菌染色為紅色。

  1.2觸酶試驗:取槽置于潔凈的試管內或玻片上,然后加3%過氧化氫數滴;或直接滴加3%過氧化氫于不含血液的細菌培養物中,立即觀察結果。有大量氣泡產生者為陽性,無則為陰性。

  1.3血漿凝固酶試驗:吸取0.5mI。兔血漿與0.5mlj金黃色葡萄球菌浸液肉湯24h培養物充分混勻,置36±1℃培養,每隔半小時觀察一次,連續觀察6h,出現凝固,即將小試管傾斜或倒置時,內容物不流動,判為陽性。同時做陰陽性對照。

  2乳樣的采集

  選取出現臨床癥狀(或者懷疑為亞臨床型乳房炎)乳房炎奶牛,先用溫水,再用0.2%新潔爾滅擦洗乳房,最后用70%的酒精擦拭乳頭。采樣者同時進行手指擦拭消毒。每個乳室先擠去頭2-3把奶,以排除污染的雜菌,每頭奶牛取乳樣5mI.于無菌乳樣杯中,待檢。

  3病原菌的分離培養

  初步診斷:將少量乳汁涂片、革蘭氏染色、鏡檢。如發現圓球形革蘭氏陽性細菌可懷疑為葡萄球菌。

  分離培養:將乳樣搖勻,分別取適量接種于營養肉湯(10%血清)、鮮血瓊脂、麥康凱瓊脂培養基(平板)后,置于37℃溫箱培養24~48h。觀察每個平板中細菌生長的情況,記錄菌落生長表現。

  普通瓊脂平板上,37℃,24~72h培養后,可見到濕潤、光滑、隆起的圓形金黃色菌落。挑取典型菌落涂片、染色、鏡檢(鏡檢呈葡萄狀排列,無芽胞、莢膜,直徑0.5~lμm,革蘭氏染色陽性),并挑取單個可疑菌落移植于肉湯和斜面培養基,經37℃培養24~48h。24h后沒有長菌的平板,再用相應的增菌肉湯涂劃一次,繼續培養,24~48h后,再作檢查,以防漏檢。將剩余的乳樣存放于4℃冰箱內備用。

  營養肉湯中呈渾濁生長,管底有少量灰白色沉淀;

  血液瓊脂平板中菌落較大,呈金黃色、圓形,周圍出現明顯的β-溶血。

  4生化鑒定

  觸酶試驗:觸酶陽性

  血漿凝固酶試驗:凝固酶試驗陽性

  糖發酵試驗:能分解甘露醇、乳糖、葡萄糖、麥芽糖、蔗糖

  色素產生情況:能產生金黃色色素

  5毒力試驗

  將上述經過生化試驗鑒定的細菌懸液用滅菌生理鹽水作適當稀釋,對隨機分組的小鼠進行腹腔注射接種,接種量為0.5mL/只(家兔皮下接種1.0mL或者靜脈接種0.1~0.5mL),能夠致死動物或者內臟出現膿腫可以確定有毒力。

  6病原菌的重分離試驗

  對接種后發病、死亡小鼠(家兔)的肝臟進行病原菌重分離。進行菌落涂片、革蘭氏染色、顯微鏡檢查,觀察所分離菌株是否為原接種菌。如果是則進一步確定病原菌為金黃色葡萄球菌。
 

編輯:foodyy

 
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關鍵詞: 金黃色葡萄球菌
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