中國檢驗檢疫科學研究院綜合檢測中心 王芳 王凱 樊赟

北京陸橋技術有限責任公司 劉沛 王磊

      近年來，我國食品安全事故頻發，痛定思痛，人們已經越來越重視飲食安全。而由微生物引起的食品污染問題作為食品安全的重要內容也受到了廣泛關注。在食品生產過程中，從生產加工到運輸銷售，各個環節都有可能被微生物污染，因此對食品進行微生物檢測必不可少。另外，隨著經濟的飛速發展，社會商品的流通量和流通速度大大增加，食品將面臨很大的微生物污染風險，但傳統微生物檢測方法不僅操作繁瑣，檢測周期長，而且對檢測人員要求高，很難滿足現代商品快速流通的發展要求，甚至影響到整個食品行業的發展。因此，人們開始尋找一種快速、簡單、準確的微生物檢測方法，北京陸橋技術有限責任公司推出了一種可滿足該要求的Easy TestTM測試片（在圖中簡稱“ET測試片”）。

      Easy TestTM測試片利用了特異性酶與特異性顯色底物反應的原理，使目標菌與非目標菌呈現可明顯區別的不同特異性顏色；Easy TestTM測試片的培養載體采用了無紡布和水溶性營養底物的設計，具有良好的吸水性，可快速吸收測試液，使微生物自動均勻分布于無紡布上，為測試液和營養底物創造了一個固定的混合區域；Easy TestTM測試片為一次性即用產品，操作簡便、無需耗費大量人力配制培養基和高壓滅菌、后續廢棄物的處理工作簡單、環保，并且最重要的是可以有效縮短檢測時間、提高檢測效率，非常適用于食品微生物檢測和環境衛生監測。

      為驗證Easy TestTM測試片的準確性和適用性，本文將Easy TestTM測試片與3M PetrifilmTM測試片（在圖中簡稱3M測試片）和國家標準中的傳統培養法進行樣品比對試驗。檢測項目包括菌落總數、大腸桿菌計數和大腸菌群計數，具體試驗過程與試驗結果如下。

      試驗方法

      選取100份食品樣品，包括肉制品、乳制品、蔬菜、豆制品、水果、油炸食品、面點、飲料、水產品、速凍食品和調味品，以國家標準方法GB 4789-2010《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗》為檢測依據，采用Easy TestTM測試片、3M PetrifilmTM測試片和國標的傳統培養基法分別測定各個樣品的菌落總數、大腸桿菌數和大腸菌群數，再將Easy TestTM測試片的結果分別與3M PetrifilmTM測試片和國家標準中的傳統培養法得到的結果進行比較，然后根據相關性判斷Easy TestTM測試片的準確度和適用性。 

      試驗結果與分析

      菌落總數試驗

      Easy TestTM菌落總數測試片以TTC（氯化三苯四氮唑，一種氧化還原指示劑）為顯色物質，TTC接受微生物呼吸鏈產生的氫后可形成非水溶性的紅色三苯甲脂，紅色三苯甲脂經微生物作用會在Easy TestTM測試片的無紡布上形成紅色點狀物（Easy TestTM測試片上的菌落分布情況見圖3），通過計數紅點，即可獲得菌落總數。Easy TestTM菌落總數測試片的培養條件為36±1℃，48±3h。

      由圖1和圖2可以看出，Easy TestTM菌落總數測試片與3M PetrifilmTM測試片所得菌落總數值的相關系數為0.9913，而Easy TestTM菌落總數測試片與PCA平板所得菌落總數值的相關系數為0.9967。可見，Easy TestTM測試片與PCA平板法具有良好的一致性，而Easy TestTM測試片與3M測試片一致性要低于Easy TestTM測試片與PCA平板法的一致性。通過分析，我們發現出現此種結果的原因為某些樣品在3M測試片上出現液化現象，使測試片無法準確計數，而Easy TestTM測試片采用了無紡布設計，可以完全避免液化現象，從而得到更真實、更準確的數值，適用性也更廣。

     圖1 ET測試片與3M測試片的相關性                 圖2 ET測試片與PCA平板的相關性

圖3 Easy TestTM測試片上的菌落分布情況

      大腸桿菌/大腸菌群試驗

      Easy TestTM大腸桿菌/大腸菌群測試片測試原理為：大腸桿菌和大腸菌群中的特異性酶降解顯色底物，打破底物原有結構，釋放出顯色因子，從而使大腸桿菌顯示為靛藍色或紫色菌落，其他大腸菌群顯示為藍綠色菌落，然后進行計數。Easy TestTM大腸桿菌/大腸菌群測試片的培養條件為36±1℃，24±1h。

      100份試驗樣品中僅有7份樣品檢出大腸桿菌，結果見表1，Easy TestTM測試片與3M測試片和GB/T 4789.38-2008平板計數法的檢測結果都具有較好的一致性。

      表1 大腸桿菌檢測陽性結果

      大腸菌群計數傳統方法采用GB 4789.3-2010《食品微生物學檢驗 大腸菌群計數》中第二法平板計數法進行，圖6為大腸桿菌和大腸菌群在Easy TestTM測試片上的生長情況。由圖4、圖5可以看出，Easy TestTM大腸桿菌/大腸菌群測試片和3M測試片所得出的數值相關系數為0.9522，而Easy TestTM大腸桿菌/大腸菌群測試片與傳統方法的相關系數為0.9648。Easy TestTM測試片與傳統方法的相關性要略高于和3M測試片的相關性，原因可能是3M測試片在壓片過程中會有部分樣液被壓出計數范圍，從而使整個計數結果產生偏差。而Easy TestTM測試片由于有無紡布作為固定培養區域，且吸水性良好，故可避免此問題。

圖6 大腸桿菌和大腸菌群在ET測試片上的生長情況

      目前，測試片作為一種微生物快速檢測產品已經逐步被廣大檢測工作者所接受，測試片法所利用的特異性酶與特異性顯色底物的反應原理也被大家所信任。Easy TestTM測試片采用無紡布為載體，不僅可以快速自動吸收測試液，省卻壓片操作，還可有效避免人為操作對檢測結果的影響。此外，使用Easy TestTM測試片進行測試時，測試液在一個固定的區域內，不會外溢，這使計數結果更加準確，同時也避免了樣液污染。也正是因為具有了以上眾多優點，Easy TestTM測試片已經廣泛應用于食品檢測領域。