金晶 殷愛(ài)琴 徐子茗
哈爾濱市南崗區(qū)疾病預(yù)防控制中心

本文對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)室在培養(yǎng)基購(gòu)置、貯存、制備、使用等方面應(yīng)采取的質(zhì)量控制措施進(jìn)行討論，談一些觀點(diǎn)和看法。希望有助于微生物檢測(cè)工作的同行們更好的開(kāi)展工作。

1 培養(yǎng)基、抗血清和試劑對(duì)微生物檢驗(yàn)質(zhì)量的影響

1.1 購(gòu)置培養(yǎng)基、抗血清和試劑時(shí)要求供應(yīng)商提供產(chǎn)品質(zhì)控證書(shū)，盡量選擇通過(guò)ISO9000認(rèn)證的生產(chǎn)廠家。

使用前首先對(duì)外觀、批號(hào)、pH 值、滅菌要求、選擇性等進(jìn)行初步評(píng)估，用陽(yáng)性和陰性對(duì)照菌株做質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)，要按照培養(yǎng)基和試劑標(biāo)簽說(shuō)明的貯藏條件保存，自配的染液每周必須作質(zhì)控。如有條件可參照國(guó)際食品微生物與食品衛(wèi)生委員會(huì)提供的關(guān)于培養(yǎng)基質(zhì)控方法進(jìn)行質(zhì)控。

1.2 使用 培養(yǎng)基的使用應(yīng)在有效期內(nèi)，開(kāi)封后的保存、制備過(guò)程中器皿管壁的潔凈度以及配制時(shí)的pH值要嚴(yán)格按規(guī)定控制，不同批號(hào)的培養(yǎng)基和試劑不要混合使用。目前市售的大多數(shù)為半成品培養(yǎng)基，無(wú)論是分裝后滅菌，還是無(wú)菌分裝，都應(yīng)進(jìn)行嚴(yán)格的無(wú)菌試驗(yàn)，證明無(wú)菌生長(zhǎng)后才能使用。從可靠來(lái)源獲得的診斷血清應(yīng)注明收到的日期，如為凍干制品，還應(yīng)注明配成水溶液的日期。使用前檢查外觀應(yīng)清澈，如出現(xiàn)混濁表示己被雜菌污染。使用時(shí)應(yīng)注意其有效期和滴度，使用前用標(biāo)準(zhǔn)菌株試驗(yàn)其敏感性和特異性。

2 培養(yǎng)基的儲(chǔ)存

干粉培養(yǎng)基應(yīng)保存在陰涼干燥處，要避免陽(yáng)光直射；未開(kāi)瓶的培養(yǎng)基在室溫下的最長(zhǎng)保存2年，開(kāi)瓶后的干粉培養(yǎng)基易吸濕，應(yīng)注意防潮并在6個(gè)月內(nèi)用完。應(yīng)定期對(duì)儲(chǔ)存中的培養(yǎng)基進(jìn)行常規(guī)檢查，如容器密閉性復(fù)查、首次開(kāi)封日期、內(nèi)容物的感官檢查，如果培養(yǎng)基發(fā)生結(jié)塊、顏色異常和其他變質(zhì)跡象就不能再使用。

3 培養(yǎng)基的性能測(cè)試

3.1 外觀控制制備好的培養(yǎng)基應(yīng)有相應(yīng)的顏色，一般的培養(yǎng)基應(yīng)澄清、無(wú)渾濁、無(wú)沉淀。使用前應(yīng)檢查培養(yǎng)基的顏色是否發(fā)生變化，是否蒸發(fā)／脫水。

3.2 污染控制 從每批制備好的培養(yǎng)基中選取部分進(jìn)行污染測(cè)試(無(wú)菌試驗(yàn))，確定無(wú)微生物生長(zhǎng)方可使用。

3.3 性能測(cè)試

3.3.1 測(cè)試菌株選擇測(cè)試菌株是具有其代表種的穩(wěn)定

特性并能有效證明實(shí)驗(yàn)室特定培養(yǎng)基最佳性能的一套菌株，應(yīng)來(lái)自國(guó)際／國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)菌種保藏中心ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株，菌株的選擇參考衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T232-2002《商業(yè)性微生物培養(yǎng)基質(zhì)量檢驗(yàn)規(guī)程》。

3.3.2 定量測(cè)試方法改良Miles-Misra法測(cè)試菌株過(guò)夜培養(yǎng)物10倍遞增稀釋?zhuān)粶y(cè)試平板和參照平板劃分為4個(gè)區(qū)域并標(biāo)記；從最高稀釋度開(kāi)始，分別滴一滴稀釋液于試驗(yàn)平板和對(duì)照平板標(biāo)記好的區(qū)域；將稀釋液涂滿(mǎn)整個(gè)1/4區(qū)域，37℃培養(yǎng)18小時(shí)；對(duì)易計(jì)數(shù)的區(qū)域計(jì)數(shù)，按公式計(jì)算生長(zhǎng)率(生長(zhǎng)率=待測(cè)培養(yǎng)基平板上得到的菌落總數(shù)／參考培養(yǎng)基平板上獲得的菌落總數(shù))。非選擇性培養(yǎng)基上目標(biāo)菌的生長(zhǎng)率應(yīng)不低于0.7，該類(lèi)培養(yǎng)基應(yīng)易于目標(biāo)菌生長(zhǎng)；選擇性培養(yǎng)基上目標(biāo)菌的生長(zhǎng)率應(yīng)不低于0.1。

3.3.3 半定量測(cè)試方法 改進(jìn)的劃線法接種法平板分ABCD四區(qū)，共劃16條線，平行線大概相隔0.5cm，每條有菌落生長(zhǎng)的劃線記作1分，每個(gè)僅一半的線有菌落生長(zhǎng)記作0.5分，沒(méi)有菌落生長(zhǎng)或生長(zhǎng)量少于劃線的一半記作0分，分?jǐn)?shù)加起來(lái)得到生長(zhǎng)指數(shù)G。目標(biāo)菌在培養(yǎng)基上應(yīng)呈現(xiàn)典型的生長(zhǎng)，而非目標(biāo)菌的生長(zhǎng)應(yīng)部分或完全被抑制， 目標(biāo)菌的生長(zhǎng)指數(shù)G大于6時(shí)，培養(yǎng)基可接受。

3．3．4 定性測(cè)試方法平板接種觀察法用接種環(huán)取測(cè)試菌培養(yǎng)物，在測(cè)試培養(yǎng)基表面劃平行直線。按標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的培養(yǎng)時(shí)間和溫度對(duì)接種后的平板進(jìn)行培養(yǎng)， 目標(biāo)菌應(yīng)呈現(xiàn)良好生長(zhǎng)，并有典型的菌落外觀、大小和形態(tài)，非目標(biāo)菌應(yīng)是微弱生長(zhǎng)或無(wú)生長(zhǎng)。