本規(guī)程旨在為微生物實(shí)驗(yàn)室操作提供一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)程；

二、適用范圍：

微生物實(shí)驗(yàn)室；

三、責(zé)任人：

實(shí)驗(yàn)室、微生物檢測(cè)員；

四、安全注意事項(xiàng)：

嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作，防止微生物污染;操作人員進(jìn)入微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)先關(guān)掉紫外燈。

五、微生物實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程：

1.微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)有無(wú)菌操作間和緩沖間，無(wú)菌操作間潔凈度應(yīng)達(dá)到10000級(jí)，室內(nèi)溫度保持在20-24℃，濕度保持在45-60%，超凈臺(tái)潔凈度應(yīng)達(dá)到100級(jí)。

2.微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保持清潔，嚴(yán)禁堆放雜物，以防污染。

3.嚴(yán)防一切滅菌器材和培養(yǎng)基污染，已污染者應(yīng)停止使用。

4.微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)備有工作濃度的消毒液(75％的酒精)。

5.微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證微生物實(shí)驗(yàn)室的潔凈度符合要求。

6.需要帶入微生物實(shí)驗(yàn)室使用的儀器，器械，平皿等一切物品，均應(yīng)包扎嚴(yán)密，并應(yīng)經(jīng)過(guò)適宜的方法滅菌。

7.工作人員進(jìn)入微生物實(shí)驗(yàn)室前，必須用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在緩沖間更換專用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(用75%的乙醇再次擦拭雙手)，方可進(jìn)入微生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行操作。

8.微生物實(shí)驗(yàn)室使用前必須打開(kāi)微生物實(shí)驗(yàn)室的紫外燈輻照滅菌30分鐘以上，并且同時(shí)打開(kāi)超凈臺(tái)進(jìn)行吹風(fēng)。操作完畢，應(yīng)及時(shí)清理微生物實(shí)驗(yàn)室，再用紫外燈輻照滅菌30分鐘。

9.供試品在檢查前，應(yīng)保持外包裝完整，不得開(kāi)啟，以防污染。檢查前，用75%的酒精棉球消毒外表面。

10.每次操作過(guò)程中，均應(yīng)做空白對(duì)照，以檢查無(wú)菌操作的可靠性。

11.吸取菌液時(shí)，必須用吸耳球吸取，切勿直接用口接觸吸管。

12.接種針每次使用前后，必須通過(guò)火焰灼燒滅菌，待冷卻后，方可接種培養(yǎng)物。

13.帶有菌液的吸管，試管，培養(yǎng)皿于高壓蒸汽滅菌鍋121℃保持20min后取出清洗。

14.如有菌液灑在桌上或地上，應(yīng)立即用75%酒精溶液覆在被污染處至少30分鐘，再做處理。工作衣帽等受到菌液污染時(shí)，應(yīng)立即脫去，高壓蒸汽滅菌后洗滌。

15.凡帶有活菌的物品，必須經(jīng)消毒后，才能在水龍頭下沖洗，嚴(yán)禁污染下水道。

16.微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)每月檢查菌落數(shù)。在超凈工作臺(tái)開(kāi)啟的狀態(tài)下，取內(nèi)徑90mm的無(wú)菌培養(yǎng)皿若干，無(wú)菌操作分別注入融化并冷卻至約45℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15mL，放至凝固后，倒置于30-35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí)，證明無(wú)菌后，取平板3-5個(gè)，分別放置工作位置的左中右等處，開(kāi)蓋暴露30分鐘后，倒置于30-35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí)，取出檢查。100級(jí)潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)平均不得超過(guò)1個(gè)菌落，10000級(jí)潔凈室平均不得超過(guò)3個(gè)菌落。如超過(guò)限度，應(yīng)對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行徹底消毒，直至重復(fù)檢查合乎要求為止。

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