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沙門氏菌常用培養基的配方及原理!

放大字體  縮小字體 發布日期:2020-07-28  來源:食品微生物檢驗公眾號
核心提示:沙門氏菌病的病原體,屬腸桿菌科,革蘭氏陰性腸道桿菌。已發現的近一千種(或菌株)。菌體大小(0.6~0.9)(1~3)微米無芽胞,一
 沙門氏菌病的病原體,屬腸桿菌科,革蘭氏陰性腸道桿菌。已發現的近一千種(或菌株)。菌體大小(0.6~0.9)×(1~3)微米無芽胞,一般無莢膜,除雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌外,大多有周身鞭毛。營養要求不高,分離培養常采用腸道選擇鑒別培養基。生化反應對本屬菌的鑒別具有重要參考意義。不液化明膠,不分解尿素,不產生吲哚,不發酵乳糖和蔗糖,能發酵葡萄糖、甘露醇、麥芽糖和衛芽糖,大多產酸產氣,少數只產酸不產氣。VP試驗陰性,有賴氨酸脫羧酶。DNA的G+C含量為50~53%。對熱抵抗力不強,在60℃15分鐘可被殺死。在水中存活2~3周。
 

檢測流程

 


 
培養基原理


緩沖蛋白胨水Buffered Peptone Water

用途:用于沙門氏菌、阪崎桿菌前增菌培養。

配方:(g/L)


用法:將各成分加入蒸餾水中,攪混均勻,靜置約10min,煮沸溶解,調節pH至7.2士0.2,高壓滅菌121,15 min。

四硫磺酸鹽煌綠增菌液基礎(TTB) Tetrathionate Broth Base

用途:用于沙門氏菌選擇性增菌培養,需加入煌綠和碘液。

配方:(g/L)

亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)Selenite Cystine Broth

用途:用于沙門氏菌選擇性增菌培養。

配方:(g/L)


用法:除亞硒酸氫鈉和L胱氨酸外,將各成分加入蒸餾水中,煮沸溶解,冷至55以下,以無菌操作加入亞硒酸氫鈉和1g/L L-胱氨酸溶液10mL(稱取0.1 gL-胱氨酸,加1mol/L氫氧化鈉溶液15mL,使溶解,再加無菌蒸餾水至100 mL即成,如為DL-胱氨酸,用量應加倍)。搖勻,調節pH至7.0士0.2。

亞硫酸鉍瓊脂(BS)(GB4789)

配方:(g/L)


用法:將前三種成分加入300mL蒸餾水(制作基礎液),硫酸亞鐵和磷酸氫二鈉分別加入20mL和30mL蒸餾水中,檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉分別加入另一 20mL和30mL蒸餾水中,瓊脂加入600mL蒸餾水中。然后分別攪拌均勻,煮沸溶解。冷至80℃左右時,先將硫酸亞鐵和磷酸氫二鈉混勻,倒入基礎液中,混勻。將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉混勻,倒入基礎液中,再混勻。調節 pH,隨即傾入瓊脂液中,混合均勻,冷至50℃~55℃。加入煌綠溶液,充分混勻后立即傾注平皿。

注:本培養基不需要高壓滅菌,在制備過程中不宜過分加熱,避免降低其選擇性,貯于室溫暗處,超過48h會降低其選擇性,本培養基宜于當天制備,第二天使用。

XLD培養基XyloseLysineDeso

用途:選擇性培養基,主要用于分離志賀氏菌屬,亦可用于分離沙門氏菌。

配方:(g/L)


用法:除酚紅和瓊脂外,將其他成分加入400 mL蒸餾水中,煮沸溶解,調節pH至7.4士0.2。另將瓊脂加入600mL蒸餾水中,煮沸溶解。

將上述兩溶液混合均勻后,再加入指示劑,待冷至50~55傾注平皿。

注:本培養基不需要高壓滅菌,在制備過程中不宜過分加熱,避免降低其選擇性,貯于室溫暗處。本培養基宜于當天制備,第二天使用。

HE瓊脂

用途:用于沙門氏菌的選擇性分離培養(GB標準)。

配方:(g/L)


原理:本培養基不需要高壓滅菌,在制備過程中不宜過分加熱,避免降低其選擇性。(按商品培養基說明操作)

 

 

 

生化培養基


三糖鐵(TSI)瓊脂Triple Sugar Iron Agar

用途:生化培養基,用于腸桿菌科細菌的生化反應篩選

配方:(g/L)


用法:除酚紅和瓊脂外,將其他成分加入400 mL蒸餾水中,煮沸溶解,調節pH至7.4士0.2。另將瓊脂加入600mL蒸餾水中,煮沸溶解。將上述兩溶液混合均勻后,再加入指示劑,混勻,分裝試管,每管約2 mL~4 mL,高壓滅菌12110 min或11515 min,滅菌后制成高層斜面,呈桔紅色。

 

尿素瓊脂(pH 7.2)

用途:生化培養基,用于細菌脲酶檢測

配方:(g/L)


用法:除尿素、瓊脂和酚紅外,將其他成分加入400 mL蒸餾水中,煮沸溶解,調節pH至7.2士0.2。另將瓊脂加人600mL蒸餾水中,煮沸溶解。將上述兩溶液混合均勻后,再加入指示劑后分裝,121℃高壓滅菌15 min。冷至50℃~55℃,加入經除菌過濾的20%尿素溶液20mL。尿素的最終濃度為2%。分裝于無菌試管內,放成斜面備用。

糖發酵管

配方:(g/L)

制法:①葡萄糖發酵管按上述成分配好后,調節pH。按0.5%加入葡萄糖,分裝于有一個倒置小管的小試管內,121℃高壓滅菌15min 。

②其他各種糖發酵管可按上述成分配好后, 分裝每瓶100mL,121℃高壓滅菌15min.另將各種糖類分別配好10%溶液,同時高壓滅菌。將5mL糖溶液加入于100mL培養基內,以無菌操作分裝小試管。

注:蔗糖不純, 加熱后會自行水解者,應采用過濾法除菌。

試驗方法:從瓊脂斜面上挑取小量培養物接種,于36℃±1℃培養, 一般2d~3d。遲緩反應 需觀察14d ~30d 。

編輯:songjiajie2010

 
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