緩沖蛋白胨水Buffered Peptone Water
用途:用于沙門氏菌、阪崎桿菌前增菌培養(yǎng)。
配方:(g/L)
用法:將各成分加入蒸餾水中,攪混均勻,靜置約10min,煮沸溶解,調(diào)節(jié)pH至7.2士0.2,高壓滅菌121℃,15 min。
四硫磺酸鹽煌綠增菌液基礎(TTB) Tetrathionate Broth Base
用途:用于沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng),需加入煌綠和碘液。
配方:(g/L)
亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)Selenite Cystine Broth
用途:用于沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)。
配方:(g/L)
用法:除亞硒酸氫鈉和L胱氨酸外,將各成分加入蒸餾水中,煮沸溶解,冷至55℃以下,以無菌操作加入亞硒酸氫鈉和1g/L L-胱氨酸溶液10mL(稱取0.1 gL-胱氨酸,加1mol/L氫氧化鈉溶液15mL,使溶解,再加無菌蒸餾水至100 mL即成,如為DL-胱氨酸,用量應加倍)。搖勻,調(diào)節(jié)pH至7.0士0.2。
亞硫酸鉍瓊脂(BS)(GB4789)
配方:(g/L)
用法:將前三種成分加入300mL蒸餾水(制作基礎液),硫酸亞鐵和磷酸氫二鈉分別加入20mL和30mL蒸餾水中,檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉分別加入另一 20mL和30mL蒸餾水中,瓊脂加入600mL蒸餾水中。然后分別攪拌均勻,煮沸溶解。冷至80℃左右時,先將硫酸亞鐵和磷酸氫二鈉混勻,倒入基礎液中,混勻。將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉混勻,倒入基礎液中,再混勻。調(diào)節(jié) pH,隨即傾入瓊脂液中,混合均勻,冷至50℃~55℃。加入煌綠溶液,充分混勻后立即傾注平皿。
注:本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌,在制備過程中不宜過分加熱,避免降低其選擇性,貯于室溫暗處,超過48h會降低其選擇性,本培養(yǎng)基宜于當天制備,第二天使用。
XLD培養(yǎng)基XyloseLysineDeso
用途:選擇性培養(yǎng)基,主要用于分離志賀氏菌屬,亦可用于分離沙門氏菌。
配方:(g/L)
用法:除酚紅和瓊脂外,將其他成分加入400 mL蒸餾水中,煮沸溶解,調(diào)節(jié)pH至7.4士0.2。另將瓊脂加入600mL蒸餾水中,煮沸溶解。
將上述兩溶液混合均勻后,再加入指示劑,待冷至50℃~55℃傾注平皿。
注:本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌,在制備過程中不宜過分加熱,避免降低其選擇性,貯于室溫暗處。本培養(yǎng)基宜于當天制備,第二天使用。
HE瓊脂
用途:用于沙門氏菌的選擇性分離培養(yǎng)(GB標準)。
配方:(g/L)
原理:本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌,在制備過程中不宜過分加熱,避免降低其選擇性。(按商品培養(yǎng)基說明操作)
三糖鐵(TSI)瓊脂Triple Sugar Iron Agar
用途:生化培養(yǎng)基,用于腸桿菌科細菌的生化反應篩選
配方:(g/L)
用法:除酚紅和瓊脂外,將其他成分加入400 mL蒸餾水中,煮沸溶解,調(diào)節(jié)pH至7.4士0.2。另將瓊脂加入600mL蒸餾水中,煮沸溶解。將上述兩溶液混合均勻后,再加入指示劑,混勻,分裝試管,每管約2 mL~4 mL,高壓滅菌121℃10 min或115℃15 min,滅菌后制成高層斜面,呈桔紅色。
尿素瓊脂(pH 7.2)
用途:生化培養(yǎng)基,用于細菌脲酶檢測
配方:(g/L)
用法:除尿素、瓊脂和酚紅外,將其他成分加入400 mL蒸餾水中,煮沸溶解,調(diào)節(jié)pH至7.2士0.2。另將瓊脂加人600mL蒸餾水中,煮沸溶解。將上述兩溶液混合均勻后,再加入指示劑后分裝,121℃高壓滅菌15 min。冷至50℃~55℃,加入經(jīng)除菌過濾的20%尿素溶液20mL。尿素的最終濃度為2%。分裝于無菌試管內(nèi),放成斜面?zhèn)溆谩?/span>
糖發(fā)酵管
配方:(g/L)
制法:①葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后,調(diào)節(jié)pH。按0.5%加入葡萄糖,分裝于有一個倒置小管的小試管內(nèi),121℃高壓滅菌15min 。
②其他各種糖發(fā)酵管可按上述成分配好后, 分裝每瓶100mL,121℃高壓滅菌15min.另將各種糖類分別配好10%溶液,同時高壓滅菌。將5mL糖溶液加入于100mL培養(yǎng)基內(nèi),以無菌操作分裝小試管。
注:蔗糖不純, 加熱后會自行水解者,應采用過濾法除菌。
試驗方法:從瓊脂斜面上挑取小量培養(yǎng)物接種,于36℃±1℃培養(yǎng), 一般2d~3d。遲緩反應 需觀察14d ~30d 。