據世界衛生組織估計,每年全世界有數千萬人感染沙門氏菌,數十萬人因此死亡。
在我國,沙門氏菌食物中毒多年來一直位居細菌性食物中毒的首位。過去幾年,我國各地通報了多起沙門氏菌感染事件。
●2020年10月1日廣東省衛生健康委公布1起突發公共衛生事件,為珠海報告的一起沙門氏菌食物中毒,發病48例,無死亡。
● 2020年9月6日,四川成都一幼兒園部分幼兒和教師相繼出現發熱腹瀉等癥狀,疾控中心對幼兒園9月1日、9月2日的所有食品留樣進行檢測,發現9月1日留樣的外購生日蛋糕中沙門氏菌呈陽性。
● 2019年10月,江西省南昌市多家醫院共接收疑似食物中毒病例50例。經查,食物中毒系食用江西卡拉多食品有限公司生產的“爆漿松松”和“流心泡芙”所致。
江西卡拉多食品有限公司10月30日晚發布公開信稱,經過監管部門和專家的深入調查,事件發生原因系生產過程中機器設備故障而造成“爆漿松松”相關產品“沙門氏菌”超標,導致食品污染。
● 2017年7月,網紅餐廳“一籠小確幸”在上海的4家門店均被食客投訴吃后拉肚子,甚至高燒掛鹽水,共致71人就醫。
7月28日,原上海市食藥監局發布情況通報稱,該餐廳違規的加工即時食品受到了沙門氏菌污染,進而引起了食物中毒事件。
●2016年9月5日至6日,河北保定高陽縣50余人在火鍋店就餐感染沙門氏菌,引起食物中毒。
什么是沙門氏菌
沙門氏菌的檢驗標準及限量要求
我國沙門氏菌的現行檢驗標準為GB 4789.4-2016《食品安全國家標準食品微生物學檢驗沙門氏菌檢驗》。
食品安全國家標準對沙門氏菌的限量控制是針對即食類預包裝食品。GB 29921-2013中對肉制品、水產制品、即食蛋制品等11種即食預包裝食品中沙門氏菌的限量要求均為:n=5, c=0,m=0 CFU。《食品安全國家標準散裝即食食品中致病菌限量》(征求意見稿)和GB14934-2016《食品安全國家標準消毒餐(飲)具》規定沙門氏菌不得檢出。而歐美等地,除根據人群和產品的風險等級設置n(5~60)外,還針對如牛、豬、雞胴體等畜禽肉原料也進行了限量控制,限量值均為:n=50~82(視類別不等), c= 1~26(視類別不等),m=0 CFU。我國目前對畜禽肉原料的沙門氏菌限量值尚無明確要求,但隨著人群消費習慣的變化以及生產模式趨向模塊化,有必要加強對整個食物鏈的安全防控。
沙門氏菌檢測
1 前增菌
25g(ml)檢樣放入225ml緩沖蛋白胨水BPW(Buffered Peptone Water)均質(建議拍打式均質器),36℃±1℃培養8~18h。
酸性或堿性樣品需用1mol/mL無菌氫氧化鈉或鹽酸調節pH至6.8±0.2,用試紙測量。
2 增菌
搖動增菌培養物,移1ml轉種于10ml四硫磺酸鈉煌綠TTB增菌液中,42℃±1℃培養18~24h。適合除傷寒副傷寒沙門氏菌培養。淺黃色。
同時,移1ml轉種于10ml亞硒酸鹽胱氨酸SC增菌液中,36℃±1℃培養18~24h。
3 分離
3.1 用接種環取增菌液1環,劃線接種,36℃±1℃培養40~48h。
典型菌落為黑色或褐色,亞利桑那菌為黑色有金屬光澤。
3.2 三種平板任選其一,用接種環取增菌液1環,劃線接種,36℃±1℃培養18~24h。
木糖賴氨酸脫氧膽鹽XLD:產生硫化氫,黑色中心周邊無色。
HE瓊脂:分解乳糖為黃色,不分解乳糖為藍綠色或藍色。
4 生化試驗及初步血清學鑒定
4.1 初步鑒定
平板上挑取2~5個典型或可疑菌落,分別接種三糖鐵TSI(表面劃s,內部穿刺)和賴氨酸脫羧酶,36℃±1℃培養18~24h,必要時延長到48小時。
4.2生化試驗
初步鑒定的同一批菌落,接種尿素瓊脂pH7.2和胰蛋白胨水(靛基質)、氰化鉀培養基,36℃±1℃培養18~24h,必要時延長到48小時。
反應序號A1:硫化氫陽性,靛基質陰性,尿素瓊脂陰性,氰化鉀陰性,賴氨酸脫羧酶陽性為典型反應,判定為沙門氏菌屬。尿素、氰化鉀、賴氨酸脫羧基三項中有兩項異常,為非沙門氏菌。
反應序號A2:硫化氫陽性,靛基質陽性,尿素瓊脂陰性,氰化鉀陰性,賴氨酸脫羧酶陽性,需補做甘露醇和山梨醇試驗。沙門氏菌靛基質陽性變體兩項都是陽性,但需要結合血清學鑒定結果進行判定。
反應序號A3:硫化氫陰性,靛基質陰性,尿素瓊脂陰性,氰化鉀陰性,賴氨酸脫羧酶多數陽性,少數陰性,補做ONPG,陰性為沙門氏菌,賴氨酸脫羧酶基本陽性,只有甲型副傷寒沙門陰性。
4.3 自動鑒定方法
根據初步鑒定結果,從營養瓊脂平板上挑取可疑菌落,用生理鹽水制備成濃度適當的菌懸液,使用API20E生化鑒定試劑盒或VITEK全自動微生物鑒定系統進行鑒定。
5 A-F多價診斷血清凝集試驗
當圖片染色和生化反應都疑為沙門氏時,應用沙門氏屬A-F群多價O診斷血清進行凝集試驗,同時用生理鹽水作對照。
5.1 抗原準備
1.2%~1.5%瓊脂培養物作為玻片凝集試驗的抗原。
O血清不凝集時,將菌株接種在2%~3%瓊脂培養基上再檢查,挑取菌苔于1ml生理鹽水中做成濃菌液,酒精燈火焰上煮沸后在檢查。檢查是否Vi抗原作用。
H抗原發育不良時,將菌株接種在0.55%~0.65%半固體瓊脂平板中央,菌落蔓延生長時,在其邊緣部分取菌檢查,或將菌株通過裝有0.3%~0.4%半固體瓊脂的小玻管1~2次,自遠端取菌培養后在檢查。
5.2 多價菌體抗原O鑒定
在玻片上劃出兩個約1cm×2cm區域,挑取1環待測菌,各放1/2環于玻片上的每一個區域上部,在其中一個區域下部加入一滴生理鹽水,作為對照。再用無菌接種環或針分別將兩個區域菌落研成乳狀液。將玻片傾斜,搖動混合1分鐘,并對著黑暗背景觀察,任何程度的凝集現象皆為陽性反應。
5.3 多價鞭毛抗原H鑒定
與菌體抗原類同。
6、檢查結果
綜合生化試驗和A-F多價診斷血清凝集結果,報告:25g(ml)樣品檢出或未檢出沙門氏菌,必要時將菌株送至專業檢驗檢疫部門進一步血清學鑒定。