1.老師，就是對于生物素和葉酸曲線和理化的標準曲線是有區別的，不用追求R值嗎？

 

標準曲線代表是微生物的生長趨勢，不同于理化檢驗的化學標準品的含量曲線，R值是趨勢線擬合程度的指標，手繪標準曲線或者Excel這兩種方式獲得的結果差異不大，均不必要體現R值，可以省略。

 

2.老師，是直接吸取一定體積的中間液加入固體奶粉樣品中進行加標回收嗎？

是的，直接混合再加提取液，算在第一步的整體的稀釋液體積里。

3.老師，你們的不銹鋼試管帽是定制的嗎？用的是螺旋口的試管嗎？

是實驗室自己定制的，不銹鋼材質。

菌種的傳代和菌懸液的制備都是用的螺口試管，易于保存和離心。

4.可以分享下葉酸的培養基嗎？BD好像買不到了？有用國產培養基好的推薦嗎?

本試驗現在用是博源諾信的葉酸培養基，貨號（F82210），對應菌株是ATCC7469，效果可以。

5.老師，我們現在買不到大于99%的葉酸標準品，這個怎么辦？

進行換算，比如買的標準品是95％的葉酸培養基，那么就用20mg除以95%，再除以1000，得到標準品的稱取的量為0.0211g（21.1mg）。

6.老師，標準曲線的制作是否可以選擇其中的部分點進行，不滿足8管，只有5、6管時是否可以做標準曲線？

標準曲線的制作要按照標準的要求，滿足8個點，每個點保證3管平行，保證每個點都有數值進行標準曲線的繪制。

7.老師，VB12紫外測定為何有兩個波長？

GB5413.14-2010標準中描述的波長為550nm，待發布的新標準GB5009.XX-XXXX給出的波長是630nm。兩者差別不大。

8.老師，請問如何減少加標體積對樣品稀釋體積的影響？

選擇好加標量后，無論選擇哪個濃度的標準液進行添加，都要確保低于第一步的稀釋倍數即定容的容量瓶的體積，實際添加時很好區分應該加哪個濃度的標準溶液。

9.老師，維生素b12傳代用專用培養基還是LB？

都可以，萊士曼氏乳桿菌比其他的維生素測定菌株需要的營養成分更精細，最好選用專用的，保證菌株活性。

10.老師，葉酸和VB12檢測時，在待測液制作環節時，您強調培養基煮沸后立即晾涼，我們實際應用是煮沸后自然晾晾，沒有立即冷卻，煮沸后到培養基使用大概用時2h。

要立即冷卻，培養基加熱時間長會顏色變深，破壞營養成分，煮沸后的培養基是輕微渾濁的，冷水浴后會發現培養基變得澄清。

11.B12第二次調pH調到6.8不好調，那最終是看靜止的pH還是搖動的時候的pH？

吸取5mL到50ml小燒瓶中后，加入約20mL的水，這樣就能保證PH計探頭浸到液體里，用0.01moL的鹽酸和氫氧化鈉調PH，濃度太大控制不好。一邊搖勻一邊測定，最終看靜止讀數。

12.B12第二次調pH調到6.8不好調，那最終是看靜止的pH還是搖動的時候的pH？

吸取5mL到50ml小燒瓶中后，加入約20mL的水，這樣就能保證PH計探頭浸到液體里，用0.01moL的鹽酸和氫氧化鈉調PH，濃度太大控制不好。一邊搖勻一邊測定，最終看靜止讀數。

13.老師，生物素測定時，制備好的菌懸液可放多長時間？

一般24小時沒有問題，但也不建議儲存太長時間。按照樣品的數量和報數日期，合理安排時間準備菌懸液，盡量使用新鮮培養的菌懸液。

14.容量瓶的清洗有要求嗎？

每個實驗室都有玻璃容器的清洗規定，按照程序清洗即可，只是在清洗后，一定要170℃高溫滅菌3h后待用，該步驟不是為了滅菌，而且是為了去除掉器皿表面殘留的微生物代謝產生的維生素對目標物測定的影響。如果實驗室有條件和空間允許，維生素測定用的玻璃器皿單獨存放，不與其他實驗混用。

15.老師，請問直接用質控樣來控制試劑盒的檢測結果可以嗎？

可以，對于生產企業，建議和質控樣一起，用自己的產品作為試劑盒驗證的樣品。

16.sc煮沸滅菌，請問：煮沸幾分鐘合適？

SC的滅菌方式參考培養基適用說明，一般的煮沸滅菌目測培養基徹底溶解，溶液清亮為宜，SC培養基含有蛋白胨，主要使蛋白胨徹底溶解，分裝保存即可。

17.生物素試劑盒法和國標方法如果每年有方法比對，方法比對結果比較好，可不可以直接用試劑盒法

即使每年的比對結果比較理想，也不建議直接用是試劑盒法，這是一種持續能力保持的體現，如果方法比對結果比較好，品牌更換不頻繁，建議擴大產品適用范圍、用不同含量的樣品對試劑盒測試等來驗證試劑盒的效能。