是不是想想自己能在里面工作就hin激動呢?
欣賞完實驗室,下面就要開始上手了。
咱們第一次先從最基礎的來,
實驗室滅菌方法詳解
首先要明確滅菌的重要性,往輕了說,我們進入實驗室會接觸到很多分子生物學實驗。會有一些像細胞間一樣要求完全無菌的環境,一旦有微生物存在,我們的幾個星期甚至幾個月的心血便都會付之東流。往重了說,一些動物解剖檢測實驗中,實驗動物可能攜帶高致病菌,對人體會有極大危害,所以實驗室第一步滅菌,萬萬要認真。
高溫滅菌法
提到高溫滅菌,相信大家日常生活中都應該用過祖傳的萬能100度法,買個新的餐具啦,水杯啦,都會習慣性的拿開水燙一燙,意在消毒,這的確也是有一定科學依據的。高溫使微生物的蛋白質及酶發生凝固或變性而死亡,是應用最廣泛且有效的滅菌方法。下面我們說兩種方法。
用高溫加高壓滅菌,不僅可殺死一般的細菌,對細菌芽胞也有殺滅效果,是最可靠、應用最普遍的滅菌法。
生活中,我們可能是這樣
當然實驗室里,我們肯定更專業
圖為實驗室常用的高壓滅菌鍋
一大波專業名詞來襲↓↓
高壓蒸氣滅菌器的類型和樣式較多,如:①下排氣式壓力蒸氣滅菌器是普遍應用的滅菌設備,壓力升至102.9kPa,溫度達121~126℃,維持20~30分鐘,可達到滅菌目的。②脈動真空壓力蒸氣滅菌器已成為目前最先進的滅菌設備。滅菌條件要求:蒸氣壓力205.8kPa,溫度達132℃以上并維持10分鐘,即可殺死包括具有頑強抵抗力的細菌芽胞在內的一切微生物。
注
意
事
項
包裹的物品不宜太大,一般應小于30cm×30cm×50cm,大于該尺寸需要酌情延長滅菌時間;
1.高壓鍋內的包裹不要排得太密,以免妨礙蒸氣透入,影響滅菌效果;
2.對塑料制品不宜放置過于擁擠,以免發生形變;
3.壓力、溫度和時間達到要求時,指示帶上和化學指示劑即應出現已滅菌的色澤或狀態;
4.銳性器械,如刀、剪不宜用此法滅菌,以免變鈍;
5.瓶裝液體滅菌時,如有塑料瓶蓋要適當旋松瓶蓋,并用牛皮紙或紗布包扎瓶口;如有橡皮塞時,應插入針頭排氣,切記要保持瓶內外的連通,防止高溫膨脹爆裂;
6.注明滅菌日期和物品保存時限,一般可保留1~2周;
7.應有專人負責,每次滅菌前,應檢查安全閥的性能,以防壓力過高發生爆炸,保證安全使用。
干熱適用于易被濕熱損壞和在干燥條件下使用更方便的物品(如金屬、玻璃、陶瓷及凡士林紗布條等)滅菌。由于其對烤箱要嚴格要求(國內產的烘箱質量都有點懸),且大功率、高溫下危險系數較大,一般不建議使用!
當然我們不是這么像軍訓時的太陽
那樣干熱
而是,當當當當~
滅菌條件為:160℃維持2小時;170℃維持1小時;180℃維持30分鐘;特殊情況下,如需要滅活器械、容器中對于溫度超級穩定的RNase時,才考慮使用(其實也可以DEPC預處理器械、容器、溶劑等,然后濕熱滅菌!)
注意
1.對滅菌對象的理化性質有一定了解,明確對象在高溫下的穩定性;
2.對設備的情況、參數有清醒認識,了解設備的溫度設計上限;
3.專項供電,確保接入電路足夠負荷;
4.滅菌過程中,相關人員要實時在崗監管,不得離崗,如遇特發情況及時切斷電源!
過濾是物理阻留的方法將細菌除去,適用的是熱不穩定試劑。不要以為是物理法就除不干凈細菌,我們用的可是孔徑為0.22μm的微濾膜,甚至是孔徑更小的納濾膜(孔徑可達20 -50nm )。
當然,孔徑小,流速自然也就慢一些,所以我們一般用小孔徑濾膜過濾之前會使用大孔徑的濾膜進行預過濾。
在正式過濾前,必須進行過濾系統的密閉性和濾膜的完整性測試。過濾過程要在等級A的潔凈室內進行(通常可在超凈臺完成)。
紫外線滅菌
從左到右分別是X-射線、紫外光。可見光、紅外光,光的波長依次遞增。常用的殺菌波長254納米位于紫外光中遠紫外線(UVC)波段。
紫外線的定義是波長在10納米到400納米之間的電磁輻射。不過在實際應用中,我們一般使用的波長一般在100納米以上。我們日常看到的一些飯店里的碗筷柜里或者一些食品加工的地方用的紫色的燈就是用的這種方法。
總的來說,紫外線的穿透能力比較差,通常也就能穿透兩三厘米的厚度。但如果用在某些物質短時間滅菌,效果還是很好的。
1.選擇紫外燈時,應該仔細核對型號、適用范圍和注意事項。不要進入開啟紫外消毒燈的室內。千萬不要對著消毒燈驗鈔或者觀察熒光,任何時候都不應該直視紫外燈管。紫外燈應該盡可能只在封閉空間內小范圍使用,并避免不必要的暴露
2.在使用過程中,應保持紫外線燈表面的清潔,一般每兩周用酒精棉球擦拭一次,發現燈管表面有灰塵、油污時,應隨時擦拭
3.用紫外線消毒物品表面時,應使照射表面受到紫外線的直接照射,且應達到足夠的照射劑量
化學滅菌法
(1)浸泡法 選用殺菌譜廣、腐蝕性弱、水溶性消毒劑,將物品浸沒于消毒劑內,在標準的濃度和時間內,達到消毒滅菌目的。
(2)擦拭法 選用易溶于水、穿透性強的消毒劑,擦拭物品表面,在標準的濃度和時間里達到消毒滅菌目的。
(3)薰蒸法 加熱或加入氧化劑,使消毒劑呈氣體,在標準的濃度和時間里達到消毒滅菌目的。
適用于室內物品及空氣消毒或精密貴重儀器和不能蒸、煮、浸泡的物品(血壓計、聽診器以及傳染病人用過的票證等),均可用此法消毒。
(4)噴霧法 借助普通噴霧器或氣溶膠噴霧器,使消毒劑產生微粒氣霧彌散在空間,進行空氣和物品表面的消毒。
(5)環氧乙烷氣體密閉消毒法 將環氧乙烷氣體置于密閉容器內,在標準的濃度、濕度和時間內達到消毒滅菌目的。
火焰滅菌法
是指用火焰直接燒灼的滅菌方法。該方法滅菌迅速、可靠、簡便,適合于耐火焰材料(如金屬、玻璃及瓷器等)物品與用具的滅菌,不適合藥品的滅菌。
最常見的火焰滅菌,酒精燈。
圖為加熱接種環
注意
1、酒精燈的燈芯要平整.
2、添加酒精時,不超過酒精燈容積的2/3;酒精不少于1/4.
3、絕對禁止向燃著的酒精燈里添加酒精,以免失火.
4、絕對禁止用酒精燈引燃另一只酒精燈.
5、用完酒精燈,必須用燈帽蓋滅,不可用嘴去吹.
6、不要碰倒酒精燈,萬一灑出的酒精在桌上燃燒起來,應立即用濕布撲蓋.
以上就是實驗室常用滅菌方法,有了它們,實驗室一切微生物統統不怕。