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▲CNAS-CL09-2013《檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物檢測領(lǐng)域的應(yīng)用說明》
常用標(biāo)準(zhǔn)菌種來源
美國菌種保藏中心ATCC
英國國家典型菌株保藏中心NCTC
中國醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏管理中心CMCC
中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心CICC
▲ ATCC和CICC標(biāo)準(zhǔn)菌種的常見包裝形式
接下來一起了解下標(biāo)準(zhǔn)菌株的活化方法
ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌種KWIK-STIKTM產(chǎn)品的活化說明
將KWIK-STIKTM產(chǎn)品平衡至室溫，撕開袋子。取出菌種管，揭下標(biāo)簽上可撕取部分，貼于原始培養(yǎng)皿或QC記錄本上。捏碎管帽處的安瓿，使其釋放出液體，將管子直立以使液體流入管底。擠壓管底的菌球，使之與液體混合，以形成均勻的菌懸液。將棉簽浸于菌懸液中，并于培養(yǎng)皿約三分之一范圍內(nèi)輕輕擠壓并旋轉(zhuǎn)涂抹。使用無菌接種環(huán)進(jìn)行三區(qū)或四區(qū)劃線，以盡可能分離出單菌落。隨即在適合的溫度和條件下倒置培養(yǎng)已接種的原始培養(yǎng)皿。按照適宜的生物危害品處置方法（如121℃高壓30 min），丟棄菌種管。
詳情請參閱北京陸橋官方網(wǎng)站資料下載區(qū)標(biāo)準(zhǔn)菌種活化官方說明
▲ ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株KWIK-STIKTM產(chǎn)品操作說明
CICC標(biāo)準(zhǔn)菌種的操作說明
使用酒精棉球擦拭凍干菌種管表面進(jìn)行消毒。將凍干管頂端置于酒精燈火焰上均勻加熱約1~2分鐘。立即滴2~3滴無菌水于加熱部位，使管壁破裂。使用鑷子或剪刀敲擊裂痕處，將管頂端敲落。吸取約0.5mL液體培養(yǎng)基于凍干管中，將凍干菌粉充分溶解。取0.2mL菌懸液轉(zhuǎn)移至裝有5mL~8mL液體培養(yǎng)基的試管中混勻，并取0.1mL菌懸液轉(zhuǎn)移至平板培養(yǎng)基上，進(jìn)行劃線分離。將液體培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基置于合適條件下培養(yǎng)。按照適宜的生物危害品處置方法（如121℃高壓30 min），丟棄菌種管。
注：也可使用砂輪在凍干管頂端打磨出裂痕，再使用鑷子或剪刀將管頂端敲落。
▲ CICC標(biāo)準(zhǔn)菌株的打管方式
菌株活化用培養(yǎng)基的選擇
標(biāo)準(zhǔn)菌株的活化需使用非選擇性（不含任何抑菌成分），且營養(yǎng)富集的培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基建議同時(shí)使用，固體培養(yǎng)基上更易觀察到菌種的形態(tài)、純度，液體培養(yǎng)基更利于菌種的復(fù)蘇和增殖，在特定條件下培養(yǎng)以優(yōu)化菌株的生長和回收，常見菌種活化培養(yǎng)基見表1和表2。
表1常見菌種活化推薦使用固體培養(yǎng)基
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菌種類別 |
菌種舉例 |
培養(yǎng)基和貨號 |
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普通細(xì)菌 |
金黃色葡萄球菌 |
胰蛋白胨大豆瓊脂 GCM168 |
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對營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌 |
化膿鏈球菌 |
羊血瓊脂平板PB001 |
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嗜鹽性弧菌 |
副溶血性弧菌 |
3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂 CM409 |
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霉菌和酵母菌 |
黑曲霉 釀酒酵母 |
沙氏葡萄糖瓊脂CM145 |
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乳酸菌 |
嗜熱鏈球菌 嬰兒雙歧桿菌 |
MRS瓊脂GCM188 |
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維生素測定用菌株 |
鼠李糖乳桿菌 |
乳酸桿菌瓊脂CM1401 |
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梭菌屬 |
產(chǎn)氣莢膜梭菌 |
羊血瓊脂平板PB001 |
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彎曲菌 |
空腸彎曲菌 |
巧克力平板PB002A 哥倫比亞血瓊脂平板 PB003A |
表2常見菌種活化推薦使用液體培養(yǎng)基
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菌種類別 |
菌種舉例 |
培養(yǎng)基和貨號 |
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普通（對營養(yǎng)要求較高）細(xì)菌 |
金黃色葡萄球菌 化膿鏈球菌 |
腦心浸出液肉湯 GCM917B |
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嗜鹽性弧菌 |
副溶血性弧菌 |
3%氯化鈉腦心浸出液肉湯 GCM917B+3%NaCl |
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霉菌和酵母菌 |
黑曲霉 釀酒酵母 |
沙氏葡萄糖肉湯CM154 |
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乳酸菌 |
嗜熱鏈球菌 嬰兒雙歧桿菌 |
MRS肉湯CM187 |
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維生素測定用菌株 |
鼠李糖乳桿菌 |
乳酸桿菌肉湯CM1402 |
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梭菌屬 |
產(chǎn)氣莢膜梭菌 |
庖肉培養(yǎng)基 CM605+CM607 |
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彎曲菌 |
空腸彎曲菌 |
Bolton肉湯CM182 +裂解脫纖維羊血+FBP濃原液 |
微生物培養(yǎng)溫度
絕大多數(shù)微生物為嗜中溫，推薦培養(yǎng)溫度為36℃±1℃；
嗜冷菌（如小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌、熒光假單胞菌等）推薦培養(yǎng)溫度25℃~30℃；
嗜熱菌（如嗜熱脂肪芽孢桿菌）推薦培養(yǎng)溫度55℃~65℃。
微生物氧氣條件
絕大多數(shù)微生物為兼性厭氧菌，正常環(huán)境培養(yǎng)；
厭氧菌（如雙歧桿菌屬、梭菌屬）需在厭氧環(huán)境下培養(yǎng)；
微需氧菌（如彎曲桿菌屬）需在微需氧環(huán)境下培養(yǎng)。
厭氧和微需氧培養(yǎng)需要配備培養(yǎng)罐、厭氧（或微需氧）產(chǎn)氣袋和氧氣指示劑。厭氧（或微需氧）產(chǎn)氣袋為一次性產(chǎn)品，培養(yǎng)罐開啟后需更換產(chǎn)氣袋。陸橋代理進(jìn)口品牌三菱瓦斯、OXOID和BD產(chǎn)品。
▲ 日本三菱產(chǎn)氣袋和培養(yǎng)罐
培養(yǎng)時(shí)間
將菌液接種到平板和肉湯中，在合適的溫度和氧氣條件下培養(yǎng)，一般細(xì)菌需要培養(yǎng)24h~48h，霉菌培養(yǎng)3d~5d。
生物安全
實(shí)驗(yàn)室的生物安全防護(hù)級別應(yīng)與其擬從事的試驗(yàn)活動相適應(yīng)。
沙門氏菌、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌等第三類病原微生物，必須在二級生物安全柜中操作，確保生物安全！
