1 方法概述：

本測試方法采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養基平皿，經若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數，以平板培養皿中的菌落數來判定潔凈環境內的活微生物數，并以此來評定潔凈室（區）的潔凈度。

2 所用的儀器和設備

2.1 高壓消毒鍋使用時應嚴格按照儀器說明書操作。

2.2 恒溫培養箱必須定期對培養箱的溫度進行校驗。

2.3 培養皿一般采用Ф90mm×15mm 的硼硅酸玻璃培養皿。

2.4 普通肉湯瓊脂培養基的準備及滅菌見附件A

3 測試步驟

3.1 采樣方法

將已制備好的培養皿，按潔凈室沉降菌采樣點布置圖的要求放置，打開培養皿蓋，使培養基面暴露30分鐘（靜態），再將培養皿蓋蓋上后倒置。

3.2 培養

3.2.1 全部采樣結束后，將培養皿倒置于恒溫培養箱中培養。

3.2.2 在30℃-35℃培養箱中培養，時間不少于48h。

3.2.3 每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否污染。可每批選定3只培養皿作對照培養。

3.3 菌落計數

3.3.1 用肉眼直接計數，標記或在菌落計數器上點計，然后用5-10倍放大鏡檢查，看是否有遺漏。

3.3.2 若培養皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數。

4 注意事項

4.1 測試用具要作滅菌處理，以確保測試的可靠性，準確性。

4.2 采取一切措施防止人為對樣本的污染。

4.3 對培養基、培養條件及其他參數做詳細的記錄。

4.4 由于細菌種類繁多，差別甚大，計數時一般用透射光于培養皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落與培養基沉淀物的區別，必要時用顯微鏡鑒別。

4.5 采樣前仔細檢查每個培養皿的質量，如發現變質，破損或污染的應剔除。

5 測試規則

5.1 沉降菌檢測前，被檢測潔凈室（區）的溫濕度須達到規定的要求，靜壓差、換氣次數、空氣流速控制在規定值內。

5.1.2 沉降菌檢測前，被檢測潔凈室（區）已經過消毒。

5.1.3 測試狀態有靜態和動態兩種，測試狀態的選擇必須符合生產的要求，并在報告中注明測試狀態。

5.2 測試人員

5.2.1  測試人員必須穿戴符合環境潔凈度級別的工作服。

5.2.2  靜態測試時，室內測試人員不得多于二人。

5.3  測試時間

5.3.1 對單向流，測試應在凈化空調系統運行不少于15min 后開始。

5.3.2 對非單向流，測試應在凈化空調系統正常運行不少于30min后開始。

5.4 沉降菌計數

5.4.1  采樣點數目及其布置

最少采樣點數目如下表

在滿足最少測點數的同時，還宜滿足最少培養皿數見下表

采樣點的布置

工作區采樣點的位置離地0.8m-1.5m左右（略高于工作面）。     

可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加采樣點。采樣點位置的詳細規則見附件B。

房間采樣點超過10個點，每7天對所有采樣點輪流監測一次。

5.5 記錄

監測記錄中應記錄房間溫度、相對濕度、測試狀態。

5.6 結果計算

5.6.1  用計數方法得出各個培養皿的菌落數。

5.6.2  平均菌落數的計算，見式（1）。

式(1)

式中：

m-平均菌落數；

m1-1號培養皿菌落數；

m2-2號培養皿菌落數；

mn-n號培養皿菌落數；

N-培養皿總數。

5.7 結果評定標準：

靜態：

注：表中各數值均為平均值。

5.7.1 潔凈室（區）內的平均菌落數必須低于所選定的評定標準。

5.7.2 若某潔凈室（區）內的平均菌落數超過評定標準，則必須對此區域先進行消毒，然后重新采樣兩次，測試結果均須合格。

6 附件

6.1 附件A：培養基的準備及滅菌

6.1.1 培養基的準備

培養基應購買國家認可的培養基。

6.1.2 培養基平皿的制備

6.1.2.1 將Ф90mm 的培養皿置于121℃濕熱滅菌20min或160℃干熱滅菌2h。

6.1.2.2 將培養基加熱熔化，冷至55℃時，在無菌操作要求下將培養基注入培養皿，每皿約15mL。

6.1.2.3 待瓊脂凝固后，將培養基平皿倒置于30℃-35℃恒溫培養箱中培養48h，若培養基平皿上確無菌落生長，即可供采樣用。

6.1.2.4 注：制備好的培養基平皿宜在2℃-8℃的環境中存放。

6.2  附件B：采樣點布置

潔凈區采樣點的布置力求均勻，避免采樣點在某局部區域過于集中，某局部區域過于稀疏。