1、什么是基質效應
LC-MS/MS分析中非目標分析物作為樣品中的共流出物,對目標分析物的離子化會產生影響和干擾,這些影響和干擾就是基質效應。
2、基質效應的產生機制
在LC-MS中,基質效應是由于非目標分析物與目標物共同流出噴霧針,對電荷產生競爭,它們將產生的霧滴牢牢吸在一起,阻止其分裂成更小的微滴,改變了帶電霧滴的表面張力,從而導致目標物的離子化效率降低或增強,引起響應降低或增高,便產生了所謂的基質抑制效應或基質增強效應。
3、基質效應的來源
基質效應主要來源于生物樣品的內源性組分,經前處理后仍存在于提取液中。包括離子顆粒物成分(電解質、鹽類)、 強極性化合物(酚類、色素)和各種有機化合物(糖類、胺類、尿素、脂類、肽類及其分析目標物的同類物及其代謝物)。其中磷脂是最主要的內源性組分, 其對電噴霧電離(ESI)和大氣壓化學電離 (APCI)均會產生離子抑制作用。含有P=O、-O-CO-NH-、OH、R-NH-、-N=、-NH-CO-NH- 等基團的農藥通常表現出較強的基質效應。
由樣品處理過程引入的外源性組分,同樣會產生基質效應。主要包括無機離子、緩沖溶液、有機酸、離子對試劑、增塑劑、表面活性劑殘留、固相萃取(SPE)小柱材料及色譜柱固定相流失物等。
4、基質效應的評價
在實際工作中,可以將空白基質匹配標準溶液與純溶劑配置標準溶液所制得的標準曲線的斜率進行比較,來評價基質效應的強弱。
計算公式如下:
其中, Sm:空白基質匹配標準溶液制得的工作曲線的斜率;
Ss:純溶劑配制的標準溶液制得的工作曲線的斜率。
若 ME >0,表現為基質增強效應,若 ME <0,表現為基質抑制效應。當0≤|ME|≤20%時,說明基質對信號干擾較低,可忽略不計;當 20%<|ME|<50%時,表現為中等強度的基質干擾,而當|ME|≥50%,則為強基質干擾。
5、基質效應的消除和補償
(1)基質凈化是最基本的消除基質效應的方法。在農殘和獸殘分析中,基質凈化是不可缺少的,液液萃取法是經典的提取方法,QuEChERS凈化法在農殘分析中應用廣泛、固相萃取法是獸殘分析中常用的基質凈化方法。通過優化樣品前處理方法可以有效降低基質效應的影響。
(2)空白基質匹配標準校正法是是農殘、獸殘分析中較為普遍的消除基質效應的方法:先用某種基質樣品,按照前處理稱樣,提取,凈化、濃縮后的提取物作為基質空白溶液,將標準品配成各濃度的空白基質匹配標液,制作標準曲線,用以對檢測結果進行校正。
(3)同位素內標法被認為是補償基質效應最有效的方法,即在標準品及樣品中同時加入相同濃度的待測物的同位素內標物。這樣可以抵消質譜離子化過程中的基質效應和消除前處理過程之間的差異。
(4)選擇合適的色譜柱、合適的流動相的組成及流速(要控制緩沖鹽的濃度<10Mm/L,不要使用離子對試劑、表面活性劑等);調整色譜分離的時間及上樣量(如推遲目標峰出峰時間等);選擇合適的離子源(對于一些特定化合物,APCI源的基質效應影響較ESI源要小)。