色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類。多為金屬或玻璃制作。有直管形、盤管形、U形管等形狀。液相色譜通常均采用填充柱。色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相，以及色譜柱的制備和操作條件。

關于色譜柱的疑問小編搜羅了100個問答，希望能夠幫到你。

1.網上對柱子是否可以反沖一直有爭論，那什么樣的柱子可以反沖，什么不可以。反沖后是正著用，還是反著用。具體到各型號柱子不僅是ODS柱，其他如，正向柱、氨基柱、離子交換柱等最好都有解釋。

答：一般的正相反相柱應該都能反沖，只有兩端篩板孔徑不對稱的柱子不能反沖，不過目前這樣的柱子已經比較少見了。反沖是為了把柱頭的污染物沖洗掉，反沖后還是正著用比較好，以免柱子的兩頭都被污染，我們一直提倡的是：正向使用，反向沖洗。

2.我在做方法開發的時候,用乙腈和水作為流動相,在調整梯度的時候發現，剛開始用60%乙腈，RT為2.5分鐘，調到40%乙腈，RT沒有變化，30%也沒有變化，一直調到20%的時候，RT突然變到了約13分鐘，請問這是什么原因？我用的是離子交柱。

答：離子交換柱的保留時間主要由洗脫液的離子強度和pH決定，你現在講的比較簡單，需要把你的方法說的詳細一點才能做具體的分析。譬如，分析物是什么情況，其含有極性電離基團和非極性基團是什么性質？離子交換柱是聚合物基質還是硅膠基質？水相是什么緩沖鹽？

3.對于一根常用的C18柱，拿到一根新柱的時候應該怎樣進行活化及維護？為什么要這樣做？

答：新柱活化，實際上是一個平衡的過程，除了用流動相平衡外，有時候還必須用所測樣品對新柱進行平衡，特別是測定分子量比較高的多肽，尤其重要。因為，分子量高的物質分子，擴散速度慢，平衡所需時間也相應較長。具體平衡方式也很簡單，多進幾次樣品，直到峰面積和保留時間穩定，再進行正式進樣測定。

如果要加快平衡時間，把前面用來平衡的進樣樣品濃度加大，或者不等洗脫完成，連續進樣多針。用待測物對新柱平衡，目的是：將硅膠基質填料表面具有非特異性吸附的位點的吸附能力飽和掉。

4.測定多肽，一般采用什么柱子？流動相是乙腈和水，還有微量的TFA。特別是像類似三肽的短肽，應該怎么選擇柱子？

答：分子量不高的多肽一般選用常規C18柱就能測定，也有用離子交換柱、水性C18柱和Hilic親水作用柱的。

5.氨基柱在進酸性樣品時，很傷柱子，如使用一段時間后，柱效降低，峰形改變，如何恢復？

答：氨基柱測酸性樣品，應該是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能會使略帶負電荷的氨基官能團質子化，導致使用一段時間后對于某些類的分析物保留性質有所改變或表現在柱效下降。建議：用5～10倍的柱體積的含0.5～1.0％NH₃的乙腈-水(50：50)溶液沖洗該柱（沖洗后當然要再用不含堿的流動相洗去多余氨），之后，再進行分析這類酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如，0.1％。

6.色譜柱的技術都有哪些？比如，封尾等，這些技術在應用時都體現在哪里？

答：色譜柱技術包括填料技術和裝柱技術，填料技術自不待言，填料的好壞對色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響。裝柱技術也沒有想象中的這么簡單，不同固定相、不同粒徑、不同柱管內徑和長度，裝柱工藝都有所不同，要裝出緊密、穩定、均一的柱床，更多是一門藝術，需要經驗積累。

7.色譜柱技術的差距在哪里？

答：色譜柱技術包括填料技術和裝柱技術，填料技術自不待言，填料的好壞對色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響。裝柱技術也沒有想象中的這么簡單，不同固定相、不同粒徑、不同柱管內徑和長度，裝柱工藝都有所不同，要裝出緊密、穩定、均一的柱床，更多是一門藝術，需要經驗積累。

國內和國外相比，我認為色譜柱的差距在于：國內公司以前都不會自己開發填料，一般買國外現成填料裝柱，買到的填料質量控制權不在自己手里。另外，因為，裝柱歷史短，經驗積累少，裝柱工藝也沒有完全達到國外水平。另外，對色譜柱性能很關鍵的基礎材料——裸硅膠，國產的還不過關，在純度、粒徑和孔徑的均一性方面和國外產品相比，差距很大。

8.柱子在什么情況下可以清洗一下篩板呢？原來也討論過這個問題，我也拆下來清洗過，但我看到柱前段的污染更甚，于是就用刀片刮了刮，然后把清洗好的篩板安裝上去。問題解決了，但使用壽命會不會減少呢？

答：柱頭污染了，就取出污染的，再裝一些填料。因為，加入你刮了些填料，那么微觀的塔板數就少了。假入你刮得不多，僅表面，可能就是一些臟物，所以，問題解決，但是，今后還會有同樣問題，再掛，那么不小心刮，影響柱效。建議還是裝一個預柱。

9.如果柱子取下來放置一段時間，需要做什么保護嗎？

答：對一般的反相柱，也就是洗干凈后放到純甲醇（乙腈）或者是80%左右的甲醇（乙腈）水中，然后用堵頭塞緊柱兩頭，以免保存溶劑揮發，應該不需要做特殊的保護。

10.流動相中加入適量的四氫呋喃可以改善峰形的機理是什么？

答：《高效液相色譜方法及應用》于世林編著的上面說：甲醇為質子給予體、乙腈為質子接受體、四氫呋喃是偶極溶劑，應該除了極性影響，還有另外的影響因素，至于分離機理，還是比較復雜的，不能看成是個萬能方法。

11.關于色譜柱的填裝問題！我個人認為現在色譜柱的填裝一般有3種情況：

①國外生產填料并填裝完成成品賣到國內；

②國外生產填料，國內填裝銷售；

③國內生產填料，國內填裝銷售。

一般情況下，第1種情況賣的最貴，也質量最好！可是我就不明白了：如果是填料的生產很復雜的話，那么填裝上國內也跟不上去嗎？為什么換在國內填裝就會出現或多或少的一些小問題呢？

答：國內填裝會出現質量小問題，和國內目前普遍做事沒有國外嚴謹有關吧。如果工藝技術上沒有問題，又能制訂并切實執行一整套嚴格的生產質量管理措施，國內填裝和國外填裝并無區別。

12.國產色譜柱在市場上占有比例如何啊？

答：國內色譜柱市場還沒有人進行過科學統計，連一年色譜柱銷售總量也眾說紛云，更別說國內生產色譜柱所占份額了。我估計是占30%左右吧。

13.預柱或保護柱用還是不用的問題！原來分析中藥品種時，我一直都是用保護柱。但來到新公司后，發現大家都沒有使用，幾個實驗室連保護柱都沒找到一個，也就是說大家從來都沒有用過。后來問一個老員工，說是有可能影響藥品分析。我就想問：安裝保護柱后會影響樣品分析嗎？我們做的大多是頭孢類的抗生素。

答：應該這樣說，加上保護柱，肯定有利于保護色譜柱不受一些顆粒物質的堵塞，肯定有害于分離度和柱效，因為保護柱中間有著死體積的存在但是如果保護柱接得好并且盡量控制其匹配性和經常更換，分離度和柱效應該影響并不大。

頭孢類的抗生素也要看到底是原料藥還是制劑嘍，有些原料藥，可以根據色譜柱的損耗選擇添加預柱（中間是個篩板），制劑的話，如果有輔料嚴重干擾或者流動相鹽分比較大，那還是最好配個保護柱。

14.用的是四元梯度泵：A：50%甲醇；B：50%水， 經常出現停或進氣泡這是什么原因？

答：水/甲醇比例在55：45時，黏度和柱壓有個極大值。50：50接近了這個極值，柱壓是比較高的，但，影響柱壓最大的還是填料粒徑和色譜柱內徑，你這個實例中不知用的什么規格的色譜柱？系統壓力高，可能會因溶劑泵中的過濾頭供液速度跟不上而導致氣泡進入系統，停機也應該是因為氣泡進入壓力下降的原因，可考慮更換液體通量更大的過濾頭。

15.填料方法的前三種都是濕法嗎，能不能對四種填充方法做一個簡短的說明？

答：

資料顯示：在正常條件下，填料粒度＞20µm時，干法填充制備柱較為合適；顆粒＜20µm時，濕法填充較為理想。填充方法一般有4種：

①  高壓勻漿法，多用于分析柱和小規模制備柱的填充；

②  徑向加壓法，Waters專利；

③  軸向加壓法，主要用于裝填大直徑柱；

④干法。柱填充的技術性很強，大多數實驗室使用已填充好的商品柱。為什么以20μm為分界點？

16.想請您具體說明一下反沖色譜柱的方法，是不連檢測器嗎？

答：反沖就是將柱子反向連到系統中。因為，有污染物反沖出來，當然不連檢測器，出液端直接接到廢液瓶就可以。

17.如果不使用不銹鋼接頭，而改用peek頭，是否可以完全解決接頭匹配問題？

答：色譜柱接頭其實大都不是色譜柱廠商自己生產的，供貨商有多個，VICI，Upchurch，Parker等，他們的標準相互之間不統一，那色譜柱接頭的標準就統一不起來。不過一般這個問題也不難解決的，換個接頭就可以了，而且現在有了萬用接頭，可以配所有不同類型的柱頭，不泄露，連接死體積又很小。

18.有的廠商為避免堵塞，使用了較大孔徑（2～5μm）的前篩板，這種情況反沖會將填料沖出。那么，你們在使用說明書中會說明前后篩板的孔徑嗎？

答：如果前后篩板孔徑不對稱，廠商肯定也會在說明書里特別提到的。

19.我在做多肽藥物時遇到下列問題：

1）基線不穩定波動大，流動相 A ：

1％TF，A：水溶液，B：1％TFA乙腈溶液檢測波長210nm流速1.0mL/mL 什么原因？怎么解決？TFA有什么作用？流動相中不加TFA見不到主峰，基線良好。

2）做完肽類樣品時怎么沖洗C18比較好；

3）藥典上介紹測定分子量大于2000的樣品，選擇柱子填料的孔徑為30nm，30nm與10nm對結果有什么區別？

答：應該是起“離子對”的作用吧。在做多肽類樣品的時候，300A孔徑的填料相對100A孔徑肯定要選擇性好點，也就是分離度相對比較好點。流動相加入TFA，在反相色譜分離多肽和蛋白質的實驗中，使用三氟乙酸(TFA)作為離子對試劑是常見的手段。流動相中的三氟乙酸通過與疏水鍵合相和殘留的極性表面以多種模式相互作用，來改善峰形、克服峰展寬和拖尾問題。

※三氟乙酸優于其他離子修飾劑的原因是它容易揮發，可以方便地從制備樣品中除去。另一方面，三氟乙酸的紫外最大吸收峰低于200nm ，對多肽在低波長處的檢測干擾很小。

20.waters，Atlantis C18柱可以用較高比例的流動相，那麼用完后應該怎麼清洗？在什麼體系中保存比教合適？

答：反相柱都可以用下面通用的方法清洗維護：
流動相中不含緩沖鹽：     
分析完成后，用甲醇（或乙腈）：水＝90：10反向沖洗色譜柱45min
流動相中含有緩沖鹽：      
分析完成后，先用甲醇（或乙腈）：水＝10：90反向沖洗45min，然后再用甲醇（或乙腈）：水＝90：10反向沖洗色譜柱45min；（注意：甲醇（或乙腈）：水＝10：90容易長菌，使用時間不可超過3天）；

水性柱保存體系也不特別：

短期保存在所用的流動相中（不含緩沖鹽），中長期保存在純甲醇（乙腈）或80%的甲醇（乙腈）/水中。

21.正相硅膠柱一般保存在什么溶劑里面比較合適？

答：短期和長期都建議保存在正相測定所用的流動相中，一般是正己烷和極少量的異丙醇。

22.磷酸鹽緩沖鹽滲透力強，為什么，是因為與醋酸鹽，枸椽酸鹽相比，基團小嗎，使用磷酸鹽緩沖液與其它緩沖液相比，會使色譜柱壽命縮短多少？

答：經常用磷酸鹽，在其它條件差不多一樣的情況下，柱子壽命肯定比不用磷酸緩沖鹽相對短一些。但用磷酸鹽也有不可取代的優點吧，否則不可能現在大部分人還在用。

  

23.反相離子對色譜法中，離子對是如何起作用的，是離子對試劑的非極性端溶解在填料的非極性端里，解離端伸向流動相，對含胺化合起離子交換作用，還是樣品與離子對生成緊密的結合物，離子對試劑掩藏化合物中的極性基團，還是這種結合物是在解離與結合的動態平衡之中？

答：首先離子對試劑的解離端和目標離子形成離子締合物，降低其極性，這樣就能較好的在柱子上保留。再者，根據疏水效應理論，離子對試劑的疏水端是很容易和C18鏈相互作用的，這樣更容易在柱子上保留，所以我認為離子對試劑作用是混合保留機制，即純粹的反相保留和離子對保留機制共同作用。

24.四烷基季銨鹽（如，四丁基硫酸氫銨、四丁基溴化銨、四丁基氫氧化銨等）在水中電離后，也形成了類似N^＋H(CH₂CH₃)₃的結構N^＋(CH₂CH₂CH₂CH₃)₄，這種結構也能有效的與Si－O－產生較強的靜電作用，此類離子對用的比較少，但它的作用僅是掩藏Si－O－嗎，它對物質的保留性能有何影響，實驗中發現檢測胺化物時，流動相中加入磷酸緩沖鹽有增加物質保留的趨勢，而加入三乙胺則會降低物質的保留能力？

答：前面提到的四丁基氫氧化銨等離子對試劑確實不如辛磺酸鈉等極性基是陰離子的離子對試劑用得普遍，原因是酸類極性物質很容易通過降低pH值的方法提高在反相色譜中的保留能力，降低pH可抑制酸的電離，使酸處于中性狀態而與疏水碳鏈的作用力增強。而堿類分析物則受硅膠基質pH上限的嚴重影響（以前上限是8，后來抬到10，直到最近雜化硅膠才將pH上限提到12左右）。

銨鹽類離子對試劑確實有辛磺酸鈉等所不具有的屏蔽硅醇基作用，但其主要作用還是疏水端和疏水固定相結合，外露的陽離子親水端和酸陰離子作用，從而提高其保留能力。當然同樣還有第二種解釋機理，離子對試劑先和分析物結合，掩藏極性基，從而提高極性分析物在反相色譜中的保留能力。而且丁基比辛基疏水性差，這種情況下，認為后面的結合機理占上風的可能性更大。
檢測胺類化合物，加入三乙胺預先和硅醇基結合，胺和硅醇基作用被三乙胺取代，保留下降是肯定的。

25.同一根色譜柱在分析完三聚氰胺后，再分析苯甲酸、山梨酸、糖精鈉時為什么保留時間會提前？

答：色譜柱被強保留物質污染后，保留時間提前和滯后的情況都有，具體要看污染物的性質，還要看分析物、固定相和污染物三者共同作用的情況，情況比較復雜，有時候比較難預測是提前還是滯后。不過你平時維護的時候，注意在測定后將污染物用有機溶劑反沖清洗，就可以減輕或避免這種情況的出現。建議每個分析方法用專門的色譜柱，長遠看，這樣更節省色譜柱的費用。

26.HPLC柱前衍生和柱后衍生的相關問題？1）為什么要衍生？2）衍生化的分類？3）進行衍生，適用的化合物有哪些？4）進行衍生化的要求有哪些？5）柱前衍生和柱后衍生的優缺點？

答：色譜技術中的化學衍生法系指在色譜過程中用特殊的化學試劑（一般稱為衍生化試劑或標記試劑）使樣品成分轉變相應的衍生物之后進行分離檢測或進行檢測的方法。

目的為：

1.將紫外—可見強吸收功能基團引入被檢測對象或將其轉變為熒光衍生物，以提高檢測靈敏度；2.提高對分析樣品的分離和選擇性。

從是否與HPLC系統聯機的角度，化學衍生法分為在線online）與離線∣Offline）兩種。從發生衍生化的場合，分為柱前衍生法pre-columnderivatization）與柱后衍生法（post-columnderivatization）兩種。目前，在HPLC中，以離線的柱前衍生法（簡稱柱前衍生法）與在線的柱后衍生法（簡稱柱后衍生法）使用居多。

27.多個樣品不好分離的時候，請問該怎么通過選擇合適的柱子來提高分離度？

答：提高分離度可從三個主要影響因素來考慮，柱效、選擇性和保留因子。可通過減小填料粒徑和增加柱長提高柱效；選擇性和固定相選擇以及pH條件有關，通過選擇合適的色譜柱和合適的pH，可以提高選擇性；有時候適當延長出峰時間增加保留因子，也可提高分離度。

28.苯基柱，氰基柱該什么時候考慮用？

答：苯基柱用于含苯環的芳香族化合物的測定時，具有較高的選擇性。CN柱可作為一個保留能力最弱的反相柱使用，也可作為一個活性降低的正相柱使用（保留時間比硅膠柱和氨基柱低很多）。

29.同樣類型柱子還有長度，粒徑等差異，這些該怎么去選擇？

答：長度和粒徑都是用來改變柱效的，選擇原則是夠用就好。

30.我前幾天剛剛裝上一個新的C18柱，在進樣之前我用100%的甲醇沖了半個多小時。剛才看到上面寫的要活化什么的？不知道我只沖洗半小時就開始用對柱子有沒有影響？對出峰什么的有沒有影響呢？

答：不是所有的測定，都需要對新柱子用所測樣品老化。但先按方法程序進樣幾針，觀察到峰面積保留時間不再有明顯變化，再開始正式測定，這是一個好習慣。按你現在的做法，如果第一針和第二針的峰面積、保留時間沒有變化，就繼續做沒影響吧。

31.現在色譜柱和儀器的接口還沒有標準化嗎，除了檢測池的出入管較小外，色譜柱的接口與peek頭不匹配的有哪個型號的色譜柱，以后使用的時候需要注意一點。同時發現使用過金屬接頭的色譜柱再換成PEEK頭，常易漏液，這是因為金屬頭易使色譜柱接口變形嗎？

答：色譜柱接頭其實大都不是色譜柱廠商自己生產的，供貨商有多個，VICI，Upchurch，Parker等，他們的標準相互之間不統一，那色譜柱接頭的標準就統一不起來。不過一般這個問題也不難解決的，換個接頭就可以了，而且現在有了萬用接頭，可以配所有不同類型的柱頭，不泄露，連接死體積又很小。

32.普通的C18柱能作為正相色譜柱使用嗎？正相色譜體系中最常用也最普通的是那種色譜柱。正相柱在使用過程中與反向柱相比有什么需要注意的地方？

答：普通C18柱作為正相柱使用，我還沒聽說過。正相色譜分離模式是指固定相的極性比流動相的極性大，反過來，流動相極性大就是反相。C18固定相屬于疏水性相對比較強的，疏水性強就是極性很弱，應該找不出極性比它更弱的流動相了。

正相體系常見的柱子有：硅膠柱、氨基柱、CN基柱和Diol二醇基柱，最普通的應該就是硅膠柱。正相柱和反相柱比，最需要注意的是水分，正相柱對水分非常敏感，流動相中水分含量的些微變化對保留時間影響很大，因此正相柱測定前平衡時間需要幾個小時甚至更長。

33.色譜柱的柱頭類型與不銹鋼毛細管接頭有6種連接方式（在講義里面提到），那么我們用戶一般是液相色譜儀是固定某一個廠家，而是根據樣品檢測需要更換不同類型的色譜柱，那么怎么判斷我所購買的色譜柱是否與不銹鋼毛細管是否匹配呢，我之前只是知道安捷倫和waters都有規定他們自己家的柱子與自己家的儀器配套是最合適的，而其他廠家的色譜柱都很少提及，在不知道的情況下，我們該怎么選擇？月旭的色譜柱柱頭類型屬于哪一種類型呢？

答：不銹鋼毛細管接頭有個缺點，用過一次后卡匝位置和距離毛細管末端的長度就固定死了。如果下次用的色譜柱的柱頭接口深度和原來的不同，就容易產生死體積和泄漏。產生的死體積一般不大，如果只引起柱效的稍微下降而沒引起拖尾，這個問題就容易被忽略。引起大家關注的是泄漏，如果用了新柱子，發現和毛細管的接口處有泄漏，就可以判斷是接頭的匹配問題。最好的判斷方法還是：詢問一下廠商色譜柱柱頭的類型和柱頭接口的深度，然后和毛細管接頭的規格比較。

如果用peek接頭，發生問題的情況就大大減少，因為，peek接頭卡匝位置是不固定的。

接頭與色譜柱的匹配，并沒有在實際色譜應用中造成很大的問題，有很多人都沒有關注到這個問題。一方面原因是使用peek接頭的情況很普遍，另外，如果發現不匹配，換個毛細管接頭還是非常方便的。

34.相對于氣相色譜，液相的優勢在哪里？做防腐劑分析時，流動相加入乙酸銨才可以出峰，原理是什么？

答：液相和氣相相比的優勢有很多,我認為主要在于應用范圍更廣。氣相只限于容易氣化的低分子量物質的分析測定，對象大部分是基礎化工原材料；而任何能溶解于某溶劑的物質都能用液相分析，適用對象是分子量從幾十到幾萬的廣大范圍。在制藥、化工、環保、食品和刑偵等諸多重要領域，液相都已成為主導的分析分離工具。也有兩者都能應用的交叉情況，但液相的制樣更簡單。液相色譜的出現克服了氣相色譜不能直接用于難揮發、熱不穩定及高分子化合物的弱點。

35.您提到“磷酸鹽緩沖鹽滲透力強，有加快硅膠溶解的副作用，它的存在會降低pH使用范圍。”，既然這樣，經常使用，柱子壽命是否也下降的快呀？

答：經常用磷酸鹽，在其它條件差不多一樣的情況下，柱子壽命肯定比不用磷酸緩沖鹽相對短一些，但，用磷酸鹽也有不可取代的優點吧，否則不可能現在大部分人還在用。

36.CN柱的保存需要在低溫條件，但是，又不能太低，使固定相凍結，怎么控制這個溫度？怎么判斷固定相是否被凍結？固定相凍結后會是什么樣的現象？

答：所謂低溫儲存，就是放到陰涼處或者放到冰箱的冷藏室。儲存液只要不是純水，冰點都比較低，純甲醇的冰點是零下90度以下了。

37.我們測試樣品時，經常會關心柱壓是否太高，但是在購買色譜柱時，并沒有說每一根色譜柱的最大使用壓力是多少？針對這樣的情況，用戶怎么判斷柱壓是否超過該柱的極限？

答：裝柱時的壓力比使用時高很多，所以柱壓對色譜柱本身在使用時沒有極限問題存在，倒是一般儀器有個40Mpa的上限。如果色譜分離度還能滿足分析方法要求，柱壓只要儀器能承受就OK吧。

38.使用緩沖液不當，使硅膠溶解并重新形成粉末后，會出現什么樣的異常情況？怎么處理？

答：出現異常就是柱壓升高。小粉末在流動相不斷沖洗帶動下，最后會聚集在柱子出口端，沉積在后篩板。處理方法只有拆下后篩板進行清洗或更換，但這樣做會影響到柱床，處理后柱效會下降。

 

39.今天才知道濾膜的材質分了這么幾種：再生纖維素、聚四氟乙烯、硝酸纖維和醋酸纖維等，之前只知道有有機系和水系之分？各種不同材質的濾膜適合于什么樣的樣品？

答：

再生纖維素膜：具有蛋白質吸收低，適用于水溶性樣品和有機溶劑；

聚四氟乙烯：適用于所有有機溶劑，酸和鹽；

尼龍66：適用于絕大多數有機溶劑和水溶液，可用于強酸，70%的乙醇，二氯甲烷，不適用與二甲基甲酰胺；

醋酸纖維：不適用有機溶劑，特別適用水基溶液。

40.我原來遇到個這樣的問題，一直不知道原因。剛拿柱子做，色譜條件是成熟的，絕對沒問題，但是該條件下保留的物質變的不被保留，比如，本來保留時間15分鐘卻怎么調比例都是2～3分鐘就出峰了，維護后，下次再使用又正常了，什么樣原因啊？

答：最大可能是發生相塌陷了。C18柱和高密鍵合封尾的C8柱，在高含水流動相下會發生相塌陷，后果就是保留能力大幅下降。用有機相比例較高的流動相沖洗后，又可恢復正常性能。

41.UPLC色譜柱可以反沖嗎？HPLC的色譜柱可以簡單反沖，但是，UPLC的色譜柱.也是一樣的嗎？如果壓力偏高，該怎么辦？

答：如果兩端篩板孔徑對稱，UPLC柱應該也是可以反沖的。發現壓力偏高，當然也可以用反沖清洗的方法維護，UPLC柱和普通色譜柱比，只是壓力高一點，不應該有什么特殊吧。

42.常規LC的柱子粒度小，柱效高，現在有3.5μm的常規柱，不知道用3.5μm*250的壓力與4.6μm的壓力相差多少？

答：一般柱子4.6mm×250mm指的是其內徑和長度。粒徑才用μm的單位，但一般標的是5μm，也有3.5μm的。其它條件一樣，光粒徑是3.5μm和5μm的柱壓差別，理論上3.5μm柱子的柱壓是5μm柱子的(5/3.5)平方倍數，即，2.04倍，簡單說就是2倍。

43.因為，不知道流動相已走完，液相色譜柱空走了大概一晚上，請問這種情況下柱子還能用嗎？如果可以應該如何再生？

答：能用的！可能柱子里會有氣泡進去，但之后，多用流動相沖沖，看到基線穩定，就沒問題了。用色譜柱的保存液低流速長時間沖洗，然后，再檢測一下柱效，看柱子是否恢復，液相最好設置一下最低壓限，這樣就不怕流動相走光而會損傷色譜柱。

44.在梯度洗脫的時候，如果整個時間程序越長，保留時間的重現性越差，尤其是后出的峰重現性差更明顯，我猜估計是流量本身的誤差引起的，但是怎么盡量避免這種情況的出現，使保留時間重現性更好？

答：這個要控制好環境溫度和柱溫，易揮發的流動相要適當密封，同時，保留時間的漂移與儀器的精度也有關系。

45.我對聚苯乙烯-二乙烯苯柱很有興趣，主要是它耐高溫、耐酸堿、但有關這方面的文獻很少，但對于他的分離效能我一直心里沒底，我的問題有三：

1）分離效果與ODS比較，是相當呢，還是更勝一籌，或是更差？

2）我原以為它是整體住，但看過資料后發現也是顆粒的比如，5μ，請問該類型的柱是否符合速率理論、是不是粒徑越小分離效果會幾何級的增加？

3）問什么沒有1.7μ的這種柱出現呢？

答：聚合物基質色譜柱的優點你已經提到了，它的缺點有：對小分子分離的柱效相對硅膠基質色譜柱要低，表面衍生化修飾也沒有在硅膠表面豐富，機械強度低耐壓性不好，還有碰到某些有機溶劑會溶脹等。。。

聚合物基質柱當然也符合速率理論！它柱效低主要是因為，分析物在聚合物固定相中的傳質速度比在硅膠表面固定相中慢很多。不過粒徑越小柱效幾何級增加的規律還是有的。1.7μm的硅膠基質填料也是最近幾年才商品化，1.7μm的聚合物基質沒出來也正常，或許永遠都不出來了，因為，聚合物耐壓差，粒徑做這么小，它根本承受不了這個高壓吧，但愿以后會有能抗高壓的聚合物填料研究出來。

46.我之前有了解過手性色譜柱，之前買過大賽璐的手性柱，其手性柱價格相比普通反相色譜柱，要高出很多倍，不知道是本身柱子裝填技術的難度大還是其他什么原因？它的主要技術關鍵在什么方面？

答：手性柱技術關鍵在于手性填料的開發，大賽璐公司在手性填料的生產技術方面申請了專利保護，別的廠商不能生產，導致手性柱價格居高不下。前幾年傳說該公司的專利保護期限快到了，國際國內有些公司就想著仿制生產。后來又聽說專利還沒到期，情況不明。

47.“樣品與離子對生成緊密的結合物，離子對試劑掩藏化合物中的極性基團”這句話是什么意思？離子對怎么樣掩蔽化合物中極性基團？不就是通過靜電引力的作用形成離子締合物，來降低其極性的嗎？

答：離子對色譜是解決強極性物質在反相色譜中保留能力不足的一個有效的途徑。有些堿性極性物質，即使用100%水相做流動相，且無論在色譜柱能承受的pH范圍內怎么去調節pH，保留能力都不夠。如果需要分離的組分中全是可以離子態存在的，那還可以選擇離子交換色譜進行分離。不然的話，就只有選擇離子對色譜方法了，盡管它有流傳的那么多副作用存在。

離子對試劑含親水基和疏水基，很像表面活性劑，所以一開始離子對色譜也稱為“皂色譜”。離子對作用的機理有兩種解釋，你上面都已經提到了。到底是哪種解釋對，尚無定論，實際上也沒必要去定論，反正兩種解釋都通就可以了。主流的解釋也是你先提到的機理，下面示意圖更直觀：

我個人認為，兩種機理都可能存在，要看離子對試劑、固定相和分析物這三者本身情況而定。如果離子對試劑的疏水端和固定相之間的結合力相對更強，示意圖的作用機理會占上風。反之，離子對試劑親水端和分析物導致掩藏極性端的作用力更強，你后面提到的機理更可能。總之，要看你用的什么離子對試劑，是何種的分析物等具體情況不同而不同吧。

48.我們在用的氨基柱時，有時候峰型突然變寬，有拖尾，用一段時間就又好了，不明白是什么原因造成的，如果要再生氨基柱的時候應該怎么做呢？是像您先前回答的問題中提到的，用一定比例的氨水沖洗嗎？氨基柱可以直接用純水沖洗嗎？記得當時買的氨基柱那個使用說明書上說不能用純水沖？是這樣的嗎？如果可以沖的話，一般沖多久？

答：氨基柱的硅膠孔內的氨基濃度非常高（大約有1mol/L），在有水存在的時候，在孔內形成一個pH=10左右甚至超過10的很強的堿性小環境，并會導致硅膠基體慢慢溶解。不過硅膠基體的溶解會生成酸性的硅醇基，又會降低孔內的pH值，延緩硅膠基體的溶解進程。一段時間后，兩個相反的過程會達成一個動態平衡，從而穩定下來。對你問題提到的這個現象，我想到的是這個原因。

氨基柱，要看氨基柱的應用模式，是正相還是HILIC？這兩種模式的情況是大不相同的。正相使用，一般很怕有水，但HILIC模式應用，一般流動相是乙腈/水，是不怕水的。不過，鍵合氨丙基基團非常容易水解，所以一般氨基柱不適宜保存有水的溶劑中。作為正相應用時，流動相中要求一點都不能含水，但清洗柱子上的污染物質，是可以含水的，因為，水有強極性，在正相色譜上洗脫能力極強，當然不必用100%純水。氨基柱具體沖洗方法，正相條件按照正相硅膠柱的清洗方法，HILIC模式按C18柱的清洗方法。

49.采用國標用C18柱測定辣椒精辣度，將辣椒精中添加吐溫系列乳化劑做成水溶辣椒精，請問乳化劑對C18柱是否有影響？

答：乳化劑和離子對試劑類似，有極性端和非極性端，肯定會對C18柱有影響。不過，如果辣椒精是極性物質，乳化劑的存在可以提高其在C18柱上的保留能力。

50.公司按照國標測定辣椒紅色素中蘇丹紅含量，標品分離很好，峰也不錯，但是，辣椒紅色素由于跟蘇丹紅性質很相似，且顏色較深，分離效果很差，收得率很低，測定結果偏差很大。該如何處理樣品？色素是否會降低柱效？

答：色素不會降低柱效，但，辣椒紅色素主峰濃度過大，會影響與臨近雜質峰的分離。可考慮稀釋樣品或試試用柱效更高的柱子。