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菌脂多糖的制備

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2013-06-28  來(lái)源:生物無(wú)憂(yōu)
核心提示:實(shí)驗(yàn)原理熱酚提取法的原理是將細(xì)菌懸液加于熱酸水混合液中,冷卻,離心混合液可分為水溶液層,內(nèi)含水溶性脂多糖及核酸等及酸層、
 實(shí)驗(yàn)原理
熱酚提取法的原理是將細(xì)菌懸液加于熱酸——水混合液中,冷卻,離心混合液可分為水溶液層,內(nèi)含水溶性脂多糖及核酸等及酸層、內(nèi)含蛋白質(zhì)。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)在酸層中也含糖類(lèi)。經(jīng)離心后沉淀含細(xì)胞殘?bào)w。
主要設(shè)備
高速離心機(jī),水浴鍋,冰箱,試管,超聲儀,透析袋等。
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 熱酚提取法: 
   1) 細(xì)菌濃懸液用鹽水經(jīng)2500轉(zhuǎn)/分,20分鐘離心洗滌一次。
   2) 將沉淀的菌混勻于蒸餾水中,放66℃水浴,然后滴加等量的90%熱酚溶液(預(yù)熱至66℃),邊加邊搖,而后在66℃水浴中攪拌25分鐘。 
   3) 在水浴中冷卻,于4℃冰箱過(guò)夜。 
   4) 以2000轉(zhuǎn)/分離心15分鐘。 
   5) 將上層水溶液吸到另一試管中。 
   6) 剩下的酚層及殘?jiān)M分可再加上述同量水在熱水浴中攪拌30分鐘,冷卻,離心,取上層水溶液。將兩次提的水溶液混合,置透析袋中于生理鹽水中透析2天,其間換幾次鹽水,以除去酚。 
   7) 透析后的水溶液層經(jīng)濃縮(如用聚乙二醇在透析袋外層涂抹以除去水分)。即成粗制脂多糖,于冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?nbsp;
2. 超聲波處理法 
   1) 獲得的菌液經(jīng)2500轉(zhuǎn)/分,20分鐘離心洗滌1—2次,將沉淀配成2倍于濕菌濃度的濃菌液。 
   2) 用超聲波發(fā)生器中頻(約相當(dāng)于12000cps)處理20分鐘。
   3) 處理液經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分,離心30分鐘,吸取上清液即為脂多糖抗原。置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?nbsp;
3. 煮沸法
將培養(yǎng)后得到的濃菌液沸水浴煮沸2小時(shí)。置冰箱靜置兩星期以上(使菌體殘?jiān)杂上鲁?。3000轉(zhuǎn)/分離心30分鐘,取上清夜即為粗脂多糖抗原,置冰箱中保存?zhèn)溆谩?/div>
編輯:songjiajie2010

 
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