HES的分子量及分子量的分布無疑是各企業(yè)及檢測機構評價產品質量優(yōu)劣環(huán)節(jié)中較為重要的指標。而關于多大分子量范圍的HES用于血漿代用品更為合適；何種檢測手段測定其分子量及分子量的分布更為準確，更為可信，更符合工業(yè)快速檢測要求等問題曾引起廣泛討論與研究。

 

      凝膠滲透色譜法（Gel Permeation Chromatography, GPC），又稱為體積排阻法（Size Exclusion Chromatography, SEC），其基本原理是利用樣品分子中含有的不同顆粒大小的分子依次經過，具有多孔徑的凝膠色譜填料顆粒（填料顆�？變炔�/填料顆粒之間間隙），致使其不同大小顆粒流經的實際路程不同而依次按從大到小的順序洗脫出來。因此，曾廣泛用于高分子分子量及分布的測定。然而，該方法需要標準物事先標定，繪制標準曲線，且該標準曲線的準確性在很大程度上依賴于標準物與未知樣品結構及性質的相似性。因此，該方法誤差較大（約10%），如果用于HES的分子量及分子量分布的測定，將很可能得不到精確可靠的數據，其質量將得不到強有力的保障。

而光散射法與GPC聯用技術的出現，迅速取代了凝膠滲透色譜法在該領域的應用。鑒于該技術不需要標樣事先繪制標準曲線；測試的結果的準確性又完全不依賴于未知樣品與標樣結構及性質的相似性，因此，該技術被認為是高分子物質分子量的絕對表征方法。

本文簡述了利用光散射法與GPC聯用技術測定HES分子量及其分布，確定了10%大分子部分以及10%小分子部分分子量等參數。

 

1.   原材料及試劑

超純水：miniQ純水儀制備；醋酸及醋酸鹽：國藥集團；羥乙基淀粉溶液（130/0.4）：5mg/ml；

 

2.  儀器及試驗條件

多角度激光光散射儀（DAWN HELEOS II，Wyatt Technology Inc., Santa Barbara, CA）: 激光波長658nm；光源GaAs。

示差折光檢測器：（Optilab rEX，Wyatt Technology Inc., Santa Barbara, CA）

凝膠柱：Shodex 804

定量環(huán)：50ul

 

3.   測試結果與分析

3.1 羥乙基淀粉折射率增量的測定

折射率增量，即溶液折射率隨溶質濃度的變化量，該值是計算分子量的重要參數之一。本試驗采用稱重稀釋法，將配制的HES母液稀釋稱成8個濃度梯度；依次進樣至Optilab rEX示差檢測器，測定其折射率增量（dn/dc），結果為：0.1352±0.0007mL/g，R2 = 0.999797。

 

 

3.2 羥乙基淀粉分子量及分布的測定

如圖2所示，羥乙基淀粉的GPC洗脫圖；該峰值分布較寬，其分散度（Mw/Mn）為2.735，重均分子量（Mw）為1.295×105 kDa；與理論值1.30×105 kDa之間的誤差小于5%。 

 

 

 

 

 

3.3 羥乙基淀粉中10%小分子部分以及10%大分子部分分子量測定

如圖3，羥乙基淀粉分子量的累計分布及微分分布圖。圖中1處顯示的是羥乙基淀粉中10%小分子部份，對應的分子量（Mw）：1.0345×105 kDa；圖中2處顯示的是羥乙基淀粉中10%大分子部份，對應的分子量（Mw）：3.8987×105 kDa。即該樣品中80%的羥乙基淀粉分子量在1.0345×105 ~ 3.8987×105 kDa范圍內。

 

 

 

                                

 

4.     結論

本試驗利用光散射法與GPC聯用技術測定HES分子量及其分布，并確定了10%小分子部分以及10%大分子部分分子量等參數。該方法簡單，快速，準確。操作流程易于程序化，規(guī)范化。適合作為羥乙基淀粉檢測的常規(guī)方法。