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動物細胞的幾種轉染方法對比

放大字體  縮小字體 發布日期:2013-08-29  來源:實驗室資訊網
核心提示: 脂質體法采用陽離子脂質轉染體,具有較高的轉染效率,不但可以轉染其他化學方法不易轉染的細胞系,而且還能轉染從寡核苷酸到人
      脂質體法采用陽離子脂質轉染體,具有較高的轉染效率,不但可以轉染其他化學方法不易轉染的細胞系,而且還能轉染從寡核苷酸到人工酵母染色體不同長度的DNA,以及RNA,和蛋白質.此外,脂質體體外轉染同時適用于瞬時表達和穩定表達,與以往不同的是脂質體還可以介導DNA和RNA轉入動物和人的體內用于基因治療。人工合成的陽離子脂質體和帶負電荷的核酸結合后形成復合物,當復合物接近細胞膜時被內吞成為內體進入細胞質,隨后DNA復合物被釋放進入細胞核內.利用脂質體轉染法最重要的就是防止其毒性,因此脂質體與質粒的比例,細胞密度以及轉染的時間長短和培養基中血清的含量都是影響轉染效率的重要問題.
 
 
 
電穿孔法常用來轉染如植物原生質體這樣的常規方法不容易轉染的細胞。電穿孔靠脈沖電流在細胞膜上打孔而將核酸導入細胞內。導入的效率與脈沖的強度和持續時間有關系,基因槍依靠攜帶了核酸的高速粒子而將核酸導入細胞內,這種方法適用于培養的細胞核在體的細胞.
 
 
DEAE葡聚糖是最早應用哺乳動物細胞(小鼠細胞、大鼠細胞各類傳代細胞等)轉染試劑之一,DEAE-葡聚糖是陽離子多聚物,它與帶負電的核酸結合后接近細胞膜而被攝取,用DEAE-葡聚糖轉染成功地用用于瞬時表達的研究,但用于穩定轉染卻不是十分可靠。
 
 
磷酸鈣共沉淀法因為試劑易取得、價格便宜而被廣泛用于瞬時轉染和穩定轉染的研究,先將DNA和CaCl2混合,然后加入到PBS中慢慢形成DNA磷酸鈣沉淀,最后把含有沉淀的混懸液加到培養的細胞上,通過細胞胞膜的內吞作用攝入DNA。磷酸鈣似乎還通過抑制血清中和細胞內的核酸酶活性而保護外源DNA免受降解.
 
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磷酸鈣法  穩轉,瞬轉   不適用于原代細胞,操作簡便但重復性差,有些細胞不適用;
 
陽離子脂質體法  穩轉,瞬轉所有細胞   適用性廣,轉染效率高,重復性好,但轉染時需除血清。轉染效果隨細胞類型變化大;
 
電穿孔法   穩轉,瞬轉所有細胞    適用性廣但細胞致死率高,DNA和細胞用量大;
 
DEAE-右旋糖苷法   瞬轉  相對簡便、結果可重復,但對細胞有一定的毒副作用,轉染時需除血清;
 
病毒介導法    穩轉   可用于難轉染的細胞、原代細胞,體內細胞等;
 
腺病毒  瞬時轉染特定宿主     可用于難轉染的細胞需考慮安全因素;
 
Biolistic顆粒傳遞法瞬轉  可用于人的表皮細胞,纖維原細胞,淋巴細胞系以及原代細胞;
 
顯微注射法  穩轉,瞬轉   轉染細胞數有限,多用于工程改造或轉基因動物的胚胎細胞。
編輯:songjiajie2010

 
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