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125I標記單克隆抗體技術

放大字體  縮小字體 發布日期:2013-10-12  來源:儀器設備行業網
核心提示:125I標記單克隆抗體技術同位素標記是一種重要的抗體標記技術,牨977年Yalow等在放射免疫測定法所作突出貢獻而獲得醫學和生理學諾
 125I標記單克隆抗體技術
 
同位素標記是一種重要的抗體標記技術,牨977年Yalow等在放射免疫測定法所作突出貢獻而獲得醫學和生理學諾貝爾獎。McAb標記同位素后除應用于放射免疫測定外,還可用于競爭結合試驗、體內腫瘤定位等。
 
  一 原理
氯胺桾即對甲苯碘氯胺鈉,在水溶液中生成次氯酸,為一種溫和氧化劑,當加入到有蛋白質和碘的弱堿水溶液中,可將I2氧化為I+并結合到氨基酸上。如標記條件溫和,標記后的McAb仍具有良好的結合活性,通過放射性同位素強度的測定可反映相應抗原的含量。
 
  二 方法
      在細胞凍存管內加入純化的McAb100μg/100μl,
      再加入10μl 0.05M磷酸緩沖液
      再加入10μl含1mCi125I
          ↓
      加入10μl氯胺-T5mg/ml溶于0.05M
      磷酸鹽緩沖液,孵育時間不超過30秒
             ↓
      加入100μl偏重亞硫酸鈉1.2mg/ml溶于
      0.05M磷酸緩沖液
             ↓
      加入200μl KI溶液少許結晶KI溶于0.05M
      磷酸緩沖液+4%牛血清白蛋白
             ↓
      用PD10柱Sephadex G25除去游離125I
      用4%BSA PBS洗脫
             ↓
      分部收集,0.5ml/管
  每管取5μl進行γ計數,計算標記抗體的比活性和標記率
           結合于McAb125I放射性強度cpm
    標記率%=───────────────────
              總放射性強度cpm
                結合于某一管McAb上的放射性強度
    比活性μCi/μgMcAb=────────────────
                    某一管McAb總量
 
  三 試劑器材
  1. 純化后的McAb
  2. 0.05M磷酸緩沖液,氯胺桾,偏重亞硫酸鈉,KI,BSA
  3. 125I
  4. 有通風裝置的超凈臺,γ計數儀
5. PD10柱Sephadex G25
 
  四 注意事項
  1. 嚴防同位素污染,工作人員必須穿著工作衣,戴口罩、帽子、手套。必須在嚴密的通風櫥或通風超凈臺中操作。操作前后對實驗室環境進行監測。所用125I和標記物應妥善保管。
  2. 如標記細胞因子、激素等,應選用更溫和的標記方法,使保持更好的生物學活性。
編輯:songjiajie2010

 
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