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大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型付傷寒沙門菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物至10mL營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，35～37℃培養(yǎng)18～24小時；
分別取培養(yǎng)液1mL加0.9%無菌氯化鈉溶液，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-5~10-7，制成每1ml含菌數(shù)10～100CFU的菌懸液。
【大腸埃希菌】取相當(dāng)于1g或1mL供試品的供試液至100mL膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，陽性菌對照加入大腸埃希菌10～100CFU，陰性菌對照加入金黃色葡萄球菌 10～100CFU，35～37℃培養(yǎng)18～24小時，取此培養(yǎng)物按《微生物限度檢查SOP》大腸埃希菌項下規(guī)定檢查。
【大腸菌群】取含適量（不少于10ml）的膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基管3支，分別加入含供試品1g或1mL 、0.1g或0.1mL、含供試品0.001g或0.001mL的供試液，陽性菌對照加入大腸埃希菌10～100CFU，陰性菌對照加入金黃色葡萄球菌 10～100CFU，35～37℃培養(yǎng)18～24小時，按《微生物限度檢查SOP》大腸菌群項下規(guī)定檢查。
【沙門菌】 取供試品10g或10mL，直接或處理后接種至適量（不少于200mL）的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，用勻漿儀或其他適宜方法混勻，陽性菌對照加入沙門菌 10～100CFU，陰性菌對照加入金黃色葡萄球菌10～100CFU，35～37℃培養(yǎng)18～24小時。按《微生物限度檢查SOP》沙門菌項下規(guī)定檢查。
【銅綠假單胞菌】取相當(dāng)于1g或1mL供試品的供試液至100mL膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，陽性菌對照加入銅綠假單胞菌10～100CFU，陰性菌對照加入大腸埃希菌10～100CFU，35～37℃培養(yǎng)18～24小時。按《微生物限度檢查SOP》沙門菌項下規(guī)定檢查。
【金黃色葡萄球菌】取相當(dāng)于1g或1mL供試品的供試液至100mL膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，陽性菌對照加入金黃色葡萄球菌10～100CFU，陰性菌對照加入大腸埃希菌 10～100CFU，35～37℃培養(yǎng)18～24小時。按《微生物限度檢查SOP》金黃色葡萄球菌項下規(guī)定檢查。
取規(guī)定量供試液，如供試液含許多藥渣，先以500轉(zhuǎn)/分鐘離心3~5分鐘，取全部上清液，再以3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，取下面1mL液體，并將適量的稀釋劑洗滌管底的洗滌液一并移入同瓶增菌液中，培養(yǎng)，本法適用于中度抑菌作用的樣品。
在供試品溶液中加入相應(yīng)的中和劑，以減除供試品中抑菌成分的作用，中和劑應(yīng)對微生物無毒性，與抑菌成分結(jié)合后的產(chǎn)物應(yīng)對微生物亦無毒性，或有毒性但不影響待檢菌的檢出。
