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解讀GB/T 4789.6中的PCR確認試驗(一)

放大字體  縮小字體 發布日期:2024-07-05  來源:藥物微生物檢驗公眾號
核心提示:之前收到網友的提問,想根據GB/T 4789.6-2016《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 致瀉大腸埃希氏菌檢驗》檢測產品,但是發現20


之前收到網友的提問,想根據
GB/T 4789.6-2016《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 致瀉大腸埃希氏菌檢驗》檢測產品,但是發現2016版與2003版檢測過程有所不同,對增加的PCR確認試驗的部分有所疑問。
   圖片1
標準中“6.5 PCR確認試驗”部分詳細介紹了PCR實驗的基本過程和耗材要求,主要步驟包括菌落挑取、核酸提取、PCR反應體系的配制、PCR循環條件、電泳、結果判定。

  對于經常做PCR的實驗員來說,按照標準操作就可以了。但是對于沒有做過PCR實驗的小白,在拿到標準之后,應該如何準備試劑耗材?怎樣進行實驗呢?
  今天先來說一說4.28 Marker
【原文】
   4.28 Marker:分子量包含 100bp、200bp、300bp、400bp、500bp、600bp、700bp、800bp、900bp、 1000bp、1500bp條帶。
  實驗小白心里想:哦莫!PCR實驗這么復雜嗎?光一個Marker試劑就要準備這么多?不是說PCR比傳統的微生物培養好做嗎?果斷放棄……
Marker是啥?
  DNA Marker(也叫DNA Ladder)由特定分子量的雙鏈DNA片段組成,已混有含藍色染料的上樣緩沖液,適用于瓊脂糖凝膠電泳時作為DNA分子量標準。
這么說太官方了,換個說法,Marker就相當于一把尺子,是尺子就肯定有刻度,這個刻度就是不同大小的條帶
聰明的你應該也猜到了,其實標準中說的不同分子量的條帶其實是在同一個Marker里的。當我們買回來一管Marker,這管Marker里就會有分子量不同的我們需要的條帶。
  Marker有不同的規格,常見的有DL2000、DL5000、DL15000、100bp DNA Ladder等。Marker在電泳之后,最后結果觀察時會呈現出如下圖的條帶。這些條帶就是“尺子”上的“刻度”。
  Marker的價格也不貴,而且每次上樣5μL就足夠,1mL的Marker也可以夠我們用很久很久了。
  便宜又好用,原來只需要準備1支就可以,是不是長舒一口氣?
  只要嘗試過PCR實驗,它的簡便快捷會超乎你想象!
  其實國外很多實驗室早已經用PCR的方法進行微生物檢測,不僅通量高、準確性還好,國內很多標準也早已使用PCR的方法進行檢測,畢竟誰不喜歡簡單又高效的檢測方法呢?
  希望今天的分享會對您的實驗有所幫助。

圖片2
如果您有關于PCR的實驗困擾也可以聯系小編,也可以試一下我們的線下PCR培訓課程哦!


編輯:songjiajie2010

 
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