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目前在DNA水平上的分子檢測方法越來越多，其檢測方法快速方便、靈敏、省時被廣泛應用到物種檢測中。其中實時熒光定量聚合酶鏈式反應（PCR）技術因其高特異性、高靈敏度、無污染等優點，在食品檢測中備受青睞。上海市質量監督檢驗技術研究院，國家食品質量監督檢驗中心（上海）的張娜娜、劉 洋*、俞 漪等人建立基于嗜酸乳桿菌SPIDR保守區域的序列結合實時熒光定量PCR方法定量檢測飲料中的嗜酸乳桿菌，以保障食品安全監管順利進行。
1.實時熒光定量PCR方法的特異性
所有嗜酸乳桿菌的標準菌株均有明顯擴增，且Ct值在16～18之間，其他菌株均無明顯的擴增；采用乳桿菌通用引物對所有菌株進行擴增時，可見到清晰的擴增條目。證明本研究建立的實時熒光定量PCR檢測方法對于嗜酸乳桿菌有較好的特異性。
2.檢測方法的靈敏度
①實時熒光定量PCR方法的絕對靈敏度
嗜酸乳桿菌ATCC4356、CICC6082、NCFM、La-14可穩定檢測的最低質量濃度為0.00058ng/μL。每個模板添加4μL，即檢測限在3pg左右，本研究的實時熒光定量PCR體系的絕對靈敏度達到3pg。
②實時熒光定量PCR的相對靈敏度
嗜酸乳桿菌ATCC4356的絕對靈敏度可穩定檢出的最低濃度為103 CFU/mL。根據絕對靈敏度和相對靈敏度的檢測可得出實時熒光定量PCR的檢測限為103CFU/mL。
3.實時熒光定量PCR方法的重復性檢測結果
嗜酸乳桿菌ATCC4356不同的核酸濃度擴增，每個質量濃度6個平行，最終實驗結果Ct值的SD介于0.14～0.56之間，RSD介于0.862%～2.55%之間，均在可接受范圍內。證明建立的實時熒光定量PCR方法重復性較好。
4.實時熒光定量PCR方法的抗干擾能力
在樣品中混入103、106CFU/mL的雜菌對實時熒光定量PCR的擴增是沒有干擾的，且檢出限仍為103CFU/mL；在不同濃度的嗜酸乳桿菌ATCC4356的核酸中添加300pg/μL、3 ng/μL、30 ng/μL的大腸桿菌ATCC25922的核酸提取物，各濃度梯度核酸檢出的Ct值均未受影響，證明建立的實時熒光定量PCR擴增體系抗干擾能力強。
5.模擬樣品的檢測及標準曲
為驗證建立的方法是否可以在實際樣品中進行檢測，在進行實樣檢測之前，利用模擬樣品對該方法進行驗證。這樣不僅可以節約時間，且節省成本在不含嗜酸乳桿菌的乳酸菌飲料為基質的模擬樣品檢測中，以Ct值為縱坐標，以嗜酸乳桿菌標準株已知的不同稀釋菌數對數Lg（CFU/g）為橫坐標建立標準曲線，得出線性方程為y=－3.312 4x＋38.939，
R2=0.987，檢測結果的線性較好且檢測限仍為103CFU/mL。
6.實際樣品檢測結果
11份樣品中，6份樣品檢測出含有嗜酸乳桿菌，編號分別為B1、B4、B6、B7、B8、B9，這與購買樣品的便簽信息一致。檢測結果可以看出，嗜酸乳桿菌的含量在5.83×102～3.68×104 CFU/mL之間，建立的實時熒光定量PCR方法可以用砸乳酸菌飲料中對嗜酸乳桿菌進行定量。
討論與結論
本研究利用設計的嗜酸乳桿菌屬的特異性引物建立實時熒光定量PCR方法在乳酸菌飲料中的檢測應用。結果證明，該方法的特異性好，檢測限低，純基因水平檢測限在3pg左右，絕對靈敏度檢測達到103CFU/mL，且重復性較好；在純基因水平與培養物水平的抗干擾能力都很強；模擬樣品檢測中其檢測限未改變，重復性較好，證明適合在市場檢測中使用；實際樣品檢測結果與標簽信息一致。并得出嗜酸乳桿菌相應的添加量，只是嗜酸乳桿菌的含量有所不同。這一研究證明該方法可應用在乳酸菌飲料中嗜酸乳桿菌的快速檢測。
