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流動相配制過程中應該避免的10個壞習慣!

放大字體  縮小字體 發布日期:2021-06-29
核心提示:流動相,作為高效液相色譜法重要的組成部分,它不僅僅是作為被分離物質的運載體,它更是直接影響到分離的好壞,測定的成功與否。流動相的物理、化學性質及其純度,直接影響到色譜系統的穩定性、分離效率、分離速度、檢測靈敏度。
 01

在添加有機相后測量流動相的pH值

 

在水溶液中,pH值被校準以提供正確的pH值——你需要確認的緩沖液是水溶液。如果你用添加了有機相的水溶液來測量pH值,pH值就會與有機相添加前的pH值不同


然而,最重要的一點是要保持一致。如果你總是在添加有機相后測量pH值,確保你在方法中說明了這一點,以便每個人都用同樣的方法。它不會百分百準確,但至少會是一致的。這可能比精確的pH值更重要。

02

 

沒有使用緩沖液

緩沖液是用來控制pH值和抵抗pH值變化的方法的許多其他部分(例如樣品基質、空氣中的二氧化碳、流動相中水的來源)可以改變流動相的pH值,從而導致保留、峰形和峰值響應的變化。甲酸,三氟乙酸等不屬于緩沖試劑。

 

03

 

沒有在緩沖液正確的pH范圍內使用

每個緩沖鹽有2個pH值單位范圍,它提供了最佳的pH穩定性。在緩沖范圍外面,鹽對pH值的變化是無效的。要么在正確的范圍內使用緩沖區,要么選擇一個范圍覆蓋所需pH值的緩沖區。

 

04

 

將緩沖液加入有機相中

將水的緩沖液混合到有機相中,會導致緩沖液沉淀的高風險——在許多情況下,變化微小,以至于可能不太明顯。常常是將有機物質添加到水相,這大大降低了緩沖沉淀的風險。

05

 

使用泵的梯度混合從0%開始

現代泵在混合流動相和在線脫氣上非常有效,然而,并不是每個使用你的方法的人都有一個高質量的泵預混合你的A和B,混合成一個單一的溶液,在A管路上100%運行。


將950mL的水溶液與50mL的有機溶液混合,然后過濾和脫氣。這降低了HPLC之間的可變性,降低了系統中氣泡和沉降的風險。


注意,在泵上混合的95:5不會和在瓶中預拌的95:5相同的保留時間——你通常需要在預混合時添加更多的有機成分。

06

 

調節緩沖液的pH值

只使用你正在使用的緩沖鹽的酸或堿。舉例來說,磷酸鈉緩沖液應該僅用磷酸或氫氧化鈉來調節。

07

 

緩沖液的全部信息

 

例如,將5g的磷酸鈉放入1000ml的水中

緩沖劑的類型(單鹽基,二鹽基,三鹽基)決定了它的pH緩沖范圍。

所需的質量濃度決定了緩沖強度。5g無水磷酸氫鈉和5g一水合磷酸氫鈉會有不同的緩沖強度,并會影響到保留。

08

 

用有機相的填充管路

如果前一種方法在B管路中使用了緩沖液,而你的方法在B管路中使用了有機相,那么緩沖液很有可能會在你的泵管路/泵頭中沉淀。我在早期就這樣做了,并且造成了很大的傷害。如果有懷疑——把它沖出來(用80:20水:有機相)。

09

 

最后一滴流動相被使用掉

如果沒有足夠的流動相來完成運行——將有50%的可能性,氣體將會在最后幾個樣品的中運行。除了磨損你的泵和色譜柱走干的風險,流動相從表面蒸發,所以在瓶子頂部的流動相與大多數體積相比成分將會改變。如果你使用瓶子里的最后少量的流動相,頂部的這個部分恰好是貫穿柱子的東西。

10

 

使用超聲儀對流動相進行脫氣

這對確保你所有的緩沖鹽溶解都很好,但這是最不有效的脫氣方法,它會迅速加熱流動相,導致有機部分蒸發。節省你日后的問題——用5分鐘的時間來過濾你的流動相——它會在一個步驟中脫氣和過濾。

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編輯:songjiajie2010

 
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