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20g/l的鐵氰化鉀溶液：稱取1g鐵氰化鉀，先用少量的水溶解后再定容至50ml。
100g/l的氫氧化鈉溶液：稱取10g氫氧化鈉，加水溶解后定容至100ml。
堿性鐵氰化鉀：將上述的5ml鐵氰化鉀和100ml的氫氧化鈉混合均勻后備用（現(xiàn)用現(xiàn)配）。
0.1mol/l的鹽酸溶液：準確移取8.5ml濃鹽酸，加水稀釋至1000ml。
2.0mol/l乙酸鈉溶液：稱取27.1g乙酸鈉，用水溶解后定容至100ml
混合酶溶液：稱取1.76g木瓜蛋白酶和1.27g淀粉酶，加水定容至50ml,渦旋混勻后冷藏密封保存，臨用時現(xiàn)取。
1.稱取5g（精確至0.01g)固體試樣或10g液體試樣于帶塞子的錐形瓶中，加60ml0.1mol/l的鹽酸溶液，充分搖勻后塞上塞子，高壓滅菌鍋中121℃，30min.冷卻至常溫后搖勻。
2.用2.0mol/l的乙酸鈉溶液調(diào)節(jié)pH至4.0左右，準確移取2.0ml混合酶溶液，搖勻后放入培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)16h。
3.將溶液用漏斗全部移至100ml容量瓶中，定容至刻度，搖勻后過濾。
試液制備
1.準確移取濾液2.0ml至10ml的離心管中，加入1.0ml的堿性鐵氰化鉀溶液，渦旋混勻后，加入2.0ml的正丁醇，渦旋1.5min后離心五分鐘。
2.吸取上層經(jīng)0.45μm有機微孔濾膜過濾，取濾液2ml放入棕色進樣瓶中待測。
到這一步維生素B1的前處理就完成了，特別要注意以下幾點：
1.混合蛋白酶和堿性鐵氰化鉀要現(xiàn)用現(xiàn)配，曾經(jīng)小編這里就出現(xiàn)過蛋白酶密封放冰箱三天就會變臭，可能是因為酶活性高，容易變質(zhì)。
2.一定不要忘記加1.0ml堿性鐵氰化鉀，否則不出峰。
3.離心之前一定要渦旋1.5min,或者手動搖勻1.5min，使維生素B1充分提取出來。
4.拔針頭時注意安全，使用完后將針頭蓋好，保護他人安全。
文章由小編編輯整理，參考GB 5009.84-2016，轉(zhuǎn)載請注明出處。
