實驗室化驗人員應(yīng)該掌握主要內(nèi)容


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一、實驗室安全守則
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二、試劑的分類及保管
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三、實驗室常用儀器
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四、分光光度法基本原理及應(yīng)用
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第一部分實驗室安全守則

(1)實驗室應(yīng)配備足夠數(shù)量的安全用品如滅火器、沖洗水龍頭、急救藥箱(備創(chuàng)可貼、碘酒、棉簽、紗布等)。
(2)分析人員必須認(rèn)真學(xué)習(xí)分析規(guī)程和有關(guān)的安全技術(shù)規(guī)程，了解化學(xué)試劑特性，設(shè)備性能及操作中可能發(fā)生事故原因，掌握預(yù)防和處理事故的方法。
(3)實驗室內(nèi)嚴(yán)禁吸煙;工作時應(yīng)穿實驗服，不應(yīng)在公共場所穿實驗服。
(4)稀釋濃硫酸的容器最好是放在塑料盆中，只能將濃硫酸慢慢倒入水中，并不斷攪動，不能相反!必要時用水冷卻。切勿將水倒入濃硫酸中，以免迸濺，造成灼傷。
(5)打開濃鹽酸、濃硝酸、濃氨水試劑瓶時要注意防護(hù)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。
(6)若遇酸堿液灼燒時，速用大量自來水沖洗患處。屬酸液燒傷，用2%碳酸氫鈉沖洗;屬堿液燒傷，用2%硼酸沖洗再用清水沖洗。
(7)夏季打開易揮發(fā)溶劑瓶塞前，應(yīng)先用冷水冷卻，瓶口不要對著人，在通風(fēng)櫥內(nèi)中進(jìn)行。
(8) 操作中不得離開崗位， 必須離開時要委托能負(fù)責(zé)任者看管。
(9)實驗室每瓶試劑必須貼有明顯的與內(nèi)容物相符的標(biāo)簽嚴(yán)禁將用完的原裝試劑空瓶不更換標(biāo)簽而裝入別種試劑發(fā)現(xiàn)試劑瓶上標(biāo)簽掉落或?qū)⒁�模糊時應(yīng)立即貼好標(biāo)簽。
(10)不使用絕緣損壞或老化的線路及電器設(shè)備。保持電器及電線的干燥。
(11)正確操作閘刀開關(guān)，應(yīng)使閘刀處于安全合上或完全拉斷的位置，不能若即若離，以防接觸不良打火花。
(12)若局部起火，應(yīng)立即切斷電源，用濕抹布或石棉布覆蓋熄滅。若火勢較猛，應(yīng)立即與有關(guān)部門聯(lián)系，請求救援。
(13)打開高溫烘箱前，須確認(rèn)箱內(nèi)溫度小于100℃后方可打開。
(14)玻璃管與膠管、膠塞等拆裝時，應(yīng)先用水潤濕，手上墊棉布，以免玻璃管折斷扎傷。
(15) 禁止隨意混合各種試劑，以免發(fā)生意外事故。
(16) 實驗完畢，將實驗臺面整理干凈，洗凈雙手，關(guān)閉水、電、氣等閥門后方可離開實驗室。
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第二部分試劑的分類及保管
化學(xué)試劑中的部分試劑具有易燃、易爆、腐蝕性或毒性等特性，除使用時注意安全和操作規(guī)程外，保管時也要注意安全，要防火、防水、防揮發(fā)、防曝光和防變質(zhì)。應(yīng)根據(jù)不同試劑的不同特性，采用不同的保存方法。
(一)一般單質(zhì)和無杌鹽類的固體
應(yīng)放在試劑柜內(nèi)，無機(jī)試劑要和有機(jī)試劑分開存放。危險性試劑應(yīng)嚴(yán)格管理，必須分類隔開放置，不能混放在一起。
(二)易燃液體
主要是有機(jī)溶劑、極易揮發(fā)成氣體，遇明火即燃燒。試驗中常用的有苯、乙醇、乙醚和丙酮(即甘油)等，應(yīng)單獨存放，要注意陰涼通風(fēng)，特別要注意遠(yuǎn)離火源。
(三)易燃固體
無機(jī)物中如硫磺、黃磷、鎂粉和鋁粉等，著火點都很低，也應(yīng)單獨存放。存放處應(yīng)通風(fēng)、干燥。白磷在空氣中可自燃，應(yīng)保存在水里，并放于避光陰涼處。
(四)遇水燃燒的物品
金屬鋰、鈉、鉀、電石和鋅粉等，可與水劇烈反應(yīng)，放出可燃性氣體。鋰要用石蠟密封，鈉和鉀應(yīng)保存在煤油中，電石和鋅粉等應(yīng)放在干燥處。
(五)強(qiáng)氧化劑
氯酸鉀、硝酸鹽、過氧化物、高錳酸鹽和重鉻酸鹽等都具有強(qiáng)氧化性，當(dāng)受熱、撞擊或混入還原性物質(zhì)時，就可能引起爆炸。保存這類物質(zhì)，一定不能與還原性物質(zhì)或可燃物放一起，應(yīng)存放在陰涼通風(fēng)處。
(六)見光分解的試劑
硝酸銀、高錳酸鉀等;與空氣接觸易氧化的試劑:如氯化亞錫、硫酸亞鐵等，都應(yīng)存于棕色瓶中，并放在陰涼通風(fēng)處。
(七)容易侵蝕玻璃的試劑
氫氟酸、含氟鹽、氫氧化鈉等應(yīng)保存在塑料試劑瓶中。
(八)劇毒試劑
氰化鉀、三氧化二砷(砒霜)、砷、汞等，應(yīng)特別注意有專人妥善保管，取用時應(yīng)嚴(yán)格做好記錄，以免發(fā)生事故。(雙人雙鎖)
試劑的使用和處理注意事項:
無論是固體還是液體試劑，一般都要保存玻璃容器內(nèi)，并用塞蓋好。容器外壁上應(yīng)貼上標(biāo)簽，注明試劑名稱，液體試劑還應(yīng)注明濃度配制日期，有效期和配制人。使用和處理試劑時還應(yīng)注意:
1、不要用手去接觸試劑，不要去嘗試劑的味道。在聞物質(zhì)的氣味時，只能用手扇動少量氣體入鼻。
2、取用固體試劑時，要用干凈的藥匙。
3、取用液體試劑時，須用左手將承接試劑的瓶口向右手方向傾斜，用右手持試劑瓶(試劑標(biāo)簽在靠近虎口一側(cè))向左手方向傾斜倒入承接的試劑瓶瓶口。
4、使用強(qiáng)酸、強(qiáng)堿等腐蝕試劑時，要特別小心。萬一酸、堿液體濺到手上或衣服上，要立即用較多的水沖洗。
5、試劑濺在操作臺臺面上，要立即擦拭干凈，以防腐蝕臺面或衣物。
6、取用試劑時應(yīng)注意保持純凈，不要把瓶塞蓋錯，取出用剩的試劑不要放回原瓶。
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第三部分：實驗室常用儀器

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容量瓶



容量瓶試漏方法:使用前，應(yīng)先檢查容量瓶瓶塞是否密合，為此，可在瓶內(nèi)裝入自來水到標(biāo)線附近，蓋上塞子，用手按住塞子，倒立容量瓶，觀察瓶口是否有水滲出，如果不漏，把瓶直立后，轉(zhuǎn)動瓶塞約180度后再倒立試一次，為使塞子不丟失不混亂，常用塑料線繩將其拴在瓶頸上。

使用容量瓶注意事項:

(1) 在精密要求高的分析工作中，容量瓶不允許放在烘箱中烘干或加熱

(2) 不要用容量瓶長期存放配好的溶液

(3) 容量瓶長期不用時，應(yīng)該洗凈，把塞子用紙墊上，以防時間久后，塞子打不開。



滴定管

滴定管有無色、棕色兩種，一般需避光的滴定液(如硝酸銀滴定液、碘滴定液、高錳酸鉀滴定液等)，需用棕色滴定管。

酸式滴定管涂油:將活塞取下，用干凈的紙或布把活塞和塞套內(nèi)壁擦干，用手指蘸少量凡士林在活塞的兩頭涂上薄薄一圈，在緊靠活塞孔兩旁不要涂凡士林，以免堵隹活塞孔，涂完后把活塞放回套內(nèi)，向同一方向旋轉(zhuǎn)活塞幾次，使凡士林分布均勻呈透明狀態(tài)，然后用橡皮圈套住，將活塞固定在塞套內(nèi)，防止滑出。

滴定管試漏
酸式滴定管試漏:關(guān)閉活塞，裝入蒸餾水至一定刻線，直立滴定管約2min,仔細(xì)觀察刻線上的液面是否下降，滴定管下端有無水滴滴下，及活塞隙縫中有無水滲出，然后將活塞轉(zhuǎn)動180°等待2min再觀察，如有漏水現(xiàn)象應(yīng)重新擦千涂油。
堿式滴定管試漏:裝蒸餾水至一定刻線，直立滴定管約2min,仔細(xì)觀察液面是否下降，或滴定管下端尖嘴上有無水滴滴下，如有漏水，則應(yīng)調(diào)換膠管中玻璃珠，選擇一個大小合適比較圓滑的配。上再試，玻璃珠太小或不圓滑都可能漏水，太大操作不方便。
酸式滴定管如何裝溶液:裝之前應(yīng)將瓶中標(biāo)準(zhǔn)溶液搖勻，使凝結(jié)在瓶內(nèi)壁的水混入溶液，為了除去滴定管內(nèi)殘留 的水分，確保標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度不變，應(yīng)先用此標(biāo)準(zhǔn)溶液淋洗滴定管2-3次，每次用約10mL,從下口放出少量(約1/3)以洗滌尖嘴部分，應(yīng)關(guān)閉活塞橫持滴定管并慢慢轉(zhuǎn)動，使溶液與管內(nèi)壁處處接觸，最后將溶液從管口倒出棄去，但不要打開活塞，以防活塞上的油脂沖入管內(nèi)。盡量倒空后再洗第二次，每次都要沖洗尖嘴部分，如此洗2-3次后，即可裝入標(biāo)準(zhǔn)溶液至“0”刻線以上。
堿式滴定管如何趕氣泡:堿式滴定管應(yīng)將膠管向上彎曲，用力捏擠玻璃珠使溶液從尖嘴噴出，以排除氣泡，堿式滴定管的氣泡一般是藏在玻璃珠附近，則必須對光檢查膠管內(nèi)氣泡是否完全趕盡，趕盡后再調(diào)節(jié)液面至0.00mL處，或記下初讀酸式滴定管裝溶液:裝之前應(yīng)將瓶中標(biāo)準(zhǔn)溶液搖勻，使凝結(jié)在瓶內(nèi)壁的水混入溶液，為了除去滴定管內(nèi)殘留的水分，確保標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度不變，應(yīng)先用此標(biāo)準(zhǔn)溶液淋洗滴定管2-3次，每次用約10mL,從下口放出少量(約1/3)以洗滌尖嘴部分，應(yīng)關(guān)閉活塞橫持滴定管并慢慢轉(zhuǎn)動，使溶液與管內(nèi)壁處處接觸，最后將溶液從管口倒出棄去，但不要打開活塞，以防活塞上的油脂沖入管內(nèi)。盡量倒空后再洗第二次，每次都要沖洗尖嘴部分，如此洗2- -3次后，即可裝入標(biāo)準(zhǔn)溶液至“0”刻線以上。
堿式滴定管趕氣泡:堿式滴定管應(yīng)將膠管向上彎曲，用力捏擠玻璃珠使溶液從尖嘴噴出，以排除氣泡，堿式滴定管的氣泡一般是藏在玻璃珠附近，則必須對光檢查膠管內(nèi)氣泡是否完全趕盡，趕盡后再調(diào)節(jié)液面至0.00mL處，或記下初讀數(shù)。
滴定的正確方法:滴定時，應(yīng)使滴定管尖嘴部分插入錐形瓶口(或燒杯口)下約1-2cm處，滴定速度不能太快，以每秒3-4滴為宜，切不可成液柱流下，邊滴邊搖，向同一方向作圓周旋轉(zhuǎn)而不應(yīng)前后振動，因那樣則會濺出溶液，臨近終點時，應(yīng)1滴或半滴地加入，并用洗瓶吹入少量沖洗錐形瓶內(nèi)壁，使附著的溶液全部流下，然后搖動錐形瓶，觀察終點是否已達(dá)到，如終點未到，繼續(xù)滴定，直至準(zhǔn)確到達(dá)終點為止。
滴定管讀數(shù)應(yīng)遵守的規(guī)則: 1)注入溶液或放出溶液后需等待30s- -1min后才能讀數(shù)(2) 滴定管應(yīng)垂直地夾在滴定臺上讀數(shù)或用兩手指拿住滴定管的上端使其垂直后讀數(shù)(3)對于無色溶液或淺色溶液，應(yīng)讀彎月面下緣實際的最低點，對于有色溶液，應(yīng)使視線與液面兩側(cè)的最高點相切，初讀和終讀應(yīng)用同一標(biāo)準(zhǔn)。
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移液管使用方法
1、檢查移液管的管口和尖嘴有無破損，若有破損則不能使用；
2、洗凈移液管
先用自來水淋洗后，用鉻酸洗滌液浸泡，操作方法如下:用右手拿移液管或吸量管上端合適位置，食指靠近管上口中指和無名指張開握住移液管外側(cè)，拇指在中指和無名指中間位置握在移液管內(nèi)側(cè)，小指自然放松;左手拿吸耳球，持握拳式，將吸耳球握在掌中，尖口向下，握緊吸耳球，排出球內(nèi)空氣，將吸耳球尖口插入或緊接在移液管(吸量管)上口，注意不能漏氣。慢慢松開左手手指，將洗滌液慢慢吸入管內(nèi)，直至刻度線以上部分，移開吸耳球，迅速用右手食指堵住移液管(吸量管)上口，等待片刻后，將洗滌液放回原瓶。并用自來水沖洗移液管(吸量管)內(nèi)、外壁至不掛水珠，再用蒸餾水洗滌3次，控干水備用。
3、吸取溶液
搖勻待吸溶液，將待吸溶液倒一小部分于一洗凈并干燥的小燒杯中，用濾紙將清洗過的移液管尖端內(nèi)外的水分吸干，并插入小燒杯中吸取溶液，當(dāng)吸至移液管容量的1/3時，立即用右手食指按住管口，取出，橫持并轉(zhuǎn)動移液管，使溶液流遍全管內(nèi)壁，將溶液從下端尖口處排入廢液杯內(nèi)。如此操作，潤洗了3一4次后即可吸取溶液。將用待吸液潤洗過的移液管插入待吸液面下1~2cm處用吸耳球按上述操作方法吸取溶液(注意移液管插入溶液不能太深，并要邊吸邊往下插入，始終保持此深度)。當(dāng)管內(nèi)液面上升至標(biāo)線以上約1~2cm處時，迅速用右手食指堵住管口(此時若溶液下落至標(biāo)線以下，應(yīng)重新吸取)，將移液管提出待吸液面，并使管尖端接觸待吸液容器內(nèi)壁片刻后提起。(在移動移液管或吸量管時，應(yīng)將移液管或吸量管保持垂直，不能傾斜)。
4、調(diào)節(jié)液面
左手另取一干凈小燒杯，將移液管管尖緊靠小燒杯內(nèi)壁，小燒杯保持傾斜，使移液管保持垂直刻度線和視線保持水平(左手不能接觸移液管。稍稍松開食指(可微微轉(zhuǎn)動移液管或吸量管)，使管內(nèi)溶液慢慢從下口流出，液面將至刻度線時，按緊右手食指，停頓片刻，再按上法將溶液的彎月面底線放至與標(biāo)線上緣相切為止，立即用食指壓緊管口。將尖口處緊靠燒杯內(nèi)壁，向燒杯口移動少許，去掉尖口處的液滴。將移液管或吸量管小心移至承接溶液的容器中。
5、放出溶液
將移液管或吸量管直立，接受器傾斜，管下端緊靠接受器內(nèi)壁，放開食指，讓溶液沿接受器內(nèi)壁流下，管內(nèi)溶液流完后，保持放液狀態(tài)停留15s將移液管或吸量管尖端在接受器靠點處靠壁前后小距離滑動幾下(或?qū)⒁埔汗芗舛丝拷邮芷鲀?nèi)壁旋轉(zhuǎn)一周)，移走移液管(殘留在管尖內(nèi)壁處的少量溶液，不可用外力強(qiáng)使其流出，因校準(zhǔn)移液管或吸量管時，已考慮了尖端內(nèi)壁處保留溶液的體積。除在管身上標(biāo)有“吹”字的，可用吸耳球吹出，不允許保留)。
6、洗凈移液管，放置在移液管架上。

廣口瓶:一般保存固體

細(xì)口瓶:一般保存液體

棕色瓶:保存見光分解的物質(zhì)

塑料瓶:保存氫氟酸等易與玻璃反應(yīng)的物質(zhì)

帶玻璃塞:不宜保存堿性物質(zhì)

帶橡皮塞:不宜保存強(qiáng)酸性、溴、強(qiáng)氧化性物質(zhì)和大多數(shù)有機(jī)物

分液漏斗的使用:
用分液漏斗進(jìn)行液-液萃取時，操作應(yīng)選擇容積體積大2倍左右的分液漏斗，把活塞擦干，涂以少許潤滑脂，轉(zhuǎn)動活塞使其均勻透明，檢查分液漏斗頂端的玻璃塞和活塞是否嚴(yán)密。然后將分液漏斗放在固定的鐵環(huán)中，關(guān)好活塞，裝入待萃取溶液和萃取溶劑，蓋好玻璃塞，使兩相之間充分接觸。

震蕩過程中要使漏斗傾斜至上口低于下口，并將下口朝向無入處，右手捏住上口頸部，用食指根部壓住玻璃塞，左手握住活塞，并以拇指和食指捏住活塞柄，握持方式以既要防止震蕩時活塞轉(zhuǎn)動或脫落，又便于轉(zhuǎn)動活塞為準(zhǔn)。
開始震蕩要慢，每搖幾次后，將漏斗仍保持傾斜狀態(tài)，旋轉(zhuǎn)活塞，放出因溶劑揮發(fā)或反應(yīng)產(chǎn)生的氣體，這常稱為“放氣”，這對低沸點溶劑或有氣體生成的萃取過程來講是十分重要的，反復(fù)地震蕩、放氣數(shù)次之后，將分液漏斗靜置于鐵環(huán)上，待乳濁液分層后，旋轉(zhuǎn)頂端玻璃塞，對好放氣孔，慢慢旋開下端活塞將下層液體放出，當(dāng)兩相界面接近活塞時，關(guān)閉活塞，靜置片刻或輕輕振搖，再把下層液體放出，上層的液體由上口倒出，切不可經(jīng)活塞口放出，以免被漏斗頸部的下層殘液所污染。


使用干燥器的注意事項:
1、干燥劑不可放得太多，以免沾污坩鍋底部。
2、搬移干燥器時，要用雙手拿著，用大拇指緊緊按住蓋。
3、打開干燥器時，不能往上掀蓋，應(yīng)用左手按住干燥器右手小心地把蓋子稍微推開，等冷空氣徐徐進(jìn)入后，才能完全推開，蓋子必須仰放在桌子上。
4、不可將太熱的物體放入干燥器中。
5、有時較熱的物體放入干燥器中后，空氣受熱膨脹會把蓋子頂起來，為了防止蓋子被打翻，應(yīng)當(dāng)用手按住，不時把蓋子稍微推開(不到1s)，以放出熱空氣。
6、灼燒或烘干后的坩鍋和沉淀物，在干燥器內(nèi)不宜放置過久，否則會因吸收一些水分而使質(zhì)量略有增加。
7、變色硅膠干燥時為藍(lán)色，受潮后變粉紅色。可以在120℃烘受潮的硅膠待其
電子天平的使用和維護(hù)
稱量前后應(yīng)檢查天平是否完好，并保持天平清潔，如在天平內(nèi)灑落藥品應(yīng)立即清理干凈，以免腐蝕天平。
天平載重不得超過最大負(fù)荷，被稱物應(yīng)放在千燥清潔的器皿中稱量揮發(fā)性、腐蝕性物體必須放在密封加蓋的容器中稱量。
不要把熱的或過冷的物體放到天平上稱量。應(yīng)在物體和天平室溫度一致后進(jìn)行稱量。
萬分之一電子天秤最小讀數(shù)0.0001g/0.1mg。
天平應(yīng)放在水泥臺上或堅實不易振動的臺上，天平室應(yīng)避開附近常有較大振動的地方。
安裝天平的室內(nèi)應(yīng)避免日光照射，室內(nèi)溫度也不能變化太大，保持在17~23℃范圍為宜;室內(nèi)要干燥，保持濕度55~75%范圍為宜。對天平不利的水蒸汽、腐蝕性氣體、粉塵切忌侵入天平和室內(nèi)。
天平室應(yīng)保持清潔干燥。天平箱內(nèi)應(yīng)放置變色硅膠干燥劑。如發(fā)現(xiàn)部分硅膠由藍(lán)色變色為粉紅色，應(yīng)立即更換，天平 箱應(yīng)加防塵罩。天平室應(yīng)注意隨手關(guān)門。天平放妥后不宜經(jīng)常搬動。若天平位置發(fā)生移動后，應(yīng)校正后，方可使用。
玻璃器皿清洗方法
(1)一般的玻璃儀器(如燒瓶、燒杯等) :先用自來水沖洗一下，然后用肥皂、洗衣粉用毛刷刷洗，再用自來水清洗，最后用純化水沖洗3次(應(yīng)順壁沖洗并充分震蕩，以提高沖洗效果)。計量玻璃儀器(如滴定管、移液管、量瓶等):也可用肥皂、洗衣粉的洗滌，但不能用毛刷刷洗。
(2)精密或難洗的玻璃儀器(滴定管、移液管、量瓶、比色管等):先用自來水沖洗后，瀝干，再用清潔液處理一段時間(一般放置過夜)，然后用自來水清洗，最后用純化水沖洗3次。
(3)洗刷儀器時，應(yīng)首先將手洗凈，免得手上的油污物沾附在儀器壁上，增加洗刷的困難。
(4)一個洗凈的玻璃儀器應(yīng)該不掛水珠(洗凈的儀器倒置時，水流出后器壁不掛水珠)。
玻璃儀器的干燥
(1)晾干不急等用的儀器，可放在儀器架上在無塵處自然干燥。
(2)急等用的儀器可用玻璃儀器氣流烘干器干燥(溫度在60~70℃為宜)。
(3)計量玻璃儀器應(yīng)自然瀝干，不能在烘箱中烘烤。
玻璃儀器的保管
要分門別類存放在試驗柜中，要放置穩(wěn)妥，高的、大的儀器放在里面。需長期保存的磨口儀器要在塞間墊一張紙片，以免日久粘住。

第四部分分光光度法基本原理及應(yīng)用

分光光度的概述
吸光光度法定義:
基于物質(zhì)對光的選擇性吸收而建立的分析方法稱為吸光光度法，包括紫外可見分光光度法及紅外光譜法等。
紫外可見分光光度法所用的光譜區(qū)域為200~780nm，其中紫外分光光度法為200~400nm，可見分光光度法為400~ 780nm。
紅外光譜法為2.5~1000um。
分光光度法概述
分光光度法的發(fā)展歷程:
最初人們發(fā)現(xiàn)很多物質(zhì)都具有顏色，例如Mn04-為紫紅色，F(xiàn)e3+為黃色，當(dāng)含有這些物質(zhì)的溶液濃度改變時，溶液顏色的深淺度也就隨著改變。溶液越濃顏色越深，溶液越稀顏色越淺，因此利用比較溶液顏色深淺的方法來確定溶液中有色物質(zhì)的含量，這種方法稱為“目視比色法”，隨后人們又認(rèn)識到溶液的顏色是由于對光的選擇性吸收而產(chǎn)生的，可以利用濾光片和光電池客觀的測量溶液的濃度，從而出現(xiàn)了“光電比色法”。隨著近代測試儀器的發(fā)展，用分光光度計代替比色計，出現(xiàn)了分光光度法。
分光光度法基本原理
溶液顏色與光吸收的關(guān)系日常所見的白光，如日光、白熾燈光，都是混合光，即它們是由波長400~780nm的電磁波按適當(dāng)強(qiáng)度比例混合而成的，這段波長范圍的光是人們視覺可覺察到的，所以稱為可見光。當(dāng)電磁波的波長小于400nm時稱為紫外光，大于780nm的稱為紅外光，都是人們視覺覺察不到的光。互補(bǔ)色光:當(dāng)將某兩種顏色的光按適當(dāng)強(qiáng)度比例混合時，可以形成白光，這兩種色光就稱為互補(bǔ)色光。
當(dāng)一束白光(混合光)通過某溶液時，如果該溶液對可見光區(qū)各種波長的光都沒有吸收，即入射光全部通過溶液，則溶液呈無色透明狀。

當(dāng)該溶液對可見光區(qū)各種波長的光全部吸收時，則該溶液呈黑色。


如某溶液對可見光區(qū)某種波長的光選擇性地吸收，則該溶液即呈現(xiàn)出被吸收波長光的互補(bǔ)色光的顏色。

例如當(dāng)一束白光通過KMnO4溶液時，該溶液選擇性的吸收了綠色波長的光，而將其它的色光兩兩互補(bǔ)成白光而通過去，只剩下紫色光未被互補(bǔ)，所以KMnO4溶液呈現(xiàn)紫色。


光吸收曲線

光吸收曲線:將不同波長的光依次通過某一定濃度和一定厚度的溶液，分別測出它對各種波長光的吸光度，以波長為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)繪制成的曲線(亦稱吸收光譜)最大吸收波長(Aμaξ) :在吸收曲線上吸收峰最大處所對應(yīng)的波長。


標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在一定條件下顯色，使用同樣厚度的吸收池，測定吸光度，上然后以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖，得一條直線，在同樣條件下測出試樣溶液的吸光度就可以從工作曲線上查出試樣溶液的濃度。但在實際工作中經(jīng)常發(fā)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成直線的情況，特別是當(dāng)吸光物質(zhì)的濃度高時，明顯的向上或向下偏離標(biāo)準(zhǔn)曲線，這種情況稱為偏離朗伯-比耳定律現(xiàn)象。
引起偏離朗伯-比爾定律的原因
(1)入射光為非單色光。嚴(yán)格講朗伯-比耳定律只適用于單色光。應(yīng)選用Aμaξ處或肩峰處測定。

(2)溶液中的化學(xué)反應(yīng)。離解、絡(luò)合、締合會破壞線性關(guān)系，應(yīng)控制條件(酸度、濃度、介質(zhì)等)。

(3)比耳定律的局限性引起偏離。嚴(yán)格說，比耳定律是一個有限定律，它只適用于濃度小于0.01mol/L的稀溶液。

定量分析一溶液濃度的測定
1、工作曲線法(標(biāo)準(zhǔn)曲線)

y=a+bx

式中:x為標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，y為相應(yīng)的吸光度



一般來說:透光度在20%~65%或吸光度值在0. 2~0. 7之間時,測定誤差相對較小。

2、對比法(直接比較法)
對比法實際相當(dāng)于工作曲線法的一個特例。y=bx實際就是只配制一個標(biāo)準(zhǔn)溶液，其中待測組分的濃度與試液盡量相近，選用最大吸收波長，在相同條件下依次測定二者的吸光度，按下式直接計算試液中待測組分的濃度。
c樣=(A樣/A標(biāo))×c標(biāo)
需注意:標(biāo)準(zhǔn)樣品和待測樣品濃度應(yīng)接近，且標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸光度在0.4-0.8以內(nèi)較好。在只測一、二個樣品，且含量大致已知時很方便。
分光光度計基本部件:


光源:
發(fā)出所需波長范圍內(nèi)的連續(xù)光譜。鎢燈(320~2500nm): 可見光區(qū)氫燈、氘燈(180~375nm) :紫外區(qū)氙燈(180~1000nm) :紫外、可見光區(qū)。


吸收池(比色皿、比色杯、比色池) :用于盛待測及參比溶液。
玻璃吸收池(370~3200nm) :可見光區(qū)
石英吸收池(185~4000nm) :紫外光區(qū)、可見光區(qū)
選用比色皿應(yīng)該考慮的主要因素
(1)測定波長。比色液吸收波長在370nm以上時可選用玻璃或石英，在370nm以下時必須使用石英比色皿。
(2)光程。比色皿有不同光程長度，通常多用10.0mm的比色皿，選擇比色皿的光程長度應(yīng)視所測溶液的吸光度而定，以使其吸光度在0.1~0.7之間為宜。
吸收池的清洗
分光光度測定樣品時，比色皿表面不清潔是造成測量誤差的常見原因之一，每當(dāng)測定有色溶液后，一定要充分洗滌。根據(jù)污染情況，可以用冷的或溫?zé)岬?40-50°C)陰離子表面活性劑的碳酸鈉溶液(%2) 浸泡，可加熱10min左右。也可用(1+3) 硝酸溶液浸泡，注意浸泡時間不宜過長，以防比色皿脫膠損壞。對于有色物質(zhì)的污染可用HCL (3moL/L)-乙醇(1+1)溶液洗滌，如急用，可用乙醇、乙醚潤洗后用吹風(fēng)機(jī)吹干。
光度測定前可用柔軟的棉織物或擦鏡紙吸去光學(xué)窗面的液珠，將擦鏡紙折疊為四層輕輕擦拭至透明。
分光光度計實驗室具備條件
(1)儀器室
室溫宜保持在15~28℃。相對濕度宜控制在45%~65%，不要超過70%。
防塵、防震和防電磁干擾。儀器周圍不應(yīng)有強(qiáng)電磁場，應(yīng)遠(yuǎn)離電場及發(fā)生高頻波的電器設(shè)備。
防腐蝕。應(yīng)防止腐蝕性氣體，如S02、N02及酸霧等侵蝕儀器部件。應(yīng)與化學(xué)操作室隔開。當(dāng)測量具有揮發(fā)性或腐蝕性樣品溶液時，吸收池應(yīng)加蓋。
防日光照射。
(2)電源、光源
儀器的工作電源要求一般為220V土20V。如供電電壓波動較大，最好配置穩(wěn)壓器。
721型分光光度計的操作步驟及注意事項
操作步驟:接通電源→選擇波長→粗調(diào)透光度T“0”(開蓋)和透光度T“100%”(關(guān)蓋)→預(yù)溫20min→放入被測液→精確調(diào)節(jié)透光度T“0”(開蓋)和透光度T“100%”(關(guān)蓋)→測定， 讀取各管吸光度→收場(關(guān)電源、罩儀器罩、登記、清洗比色杯等)注意事項:比色時，手拿比色杯的毛面，液體倒杯高的2/3或4/5，比色杯不能用硬毛刷刷洗，也不能用高溫烘烤。


分光光度計操作注意事項及維護(hù)

注意事項:

(1) 每臺儀器所配置的比色池不能與其他儀器上的比色池單個調(diào)換。

(2) 如果大幅度改變測試波長時，需數(shù)分鐘才能正常工作。

(3)不測量時不要開光源燈。

儀器維護(hù):

(1) 儀器使用完畢后，用隨機(jī)提供的套子罩住，在套子內(nèi)應(yīng)放數(shù)袋硅膠，以免燈室受潮。

(2)經(jīng)常注意防潮硅膠是否變色，如發(fā)現(xiàn)硅膠顏色變紅，應(yīng)將其取出調(diào)換或

烘干至藍(lán)色，待冷卻后再置入。

(3)拿取吸收池時，絕不可觸及光學(xué)窗面使用完畢后，應(yīng)立即清洗，洗滌時只能涮洗、沖洗、浸泡，絕不能刷洗!洗凈的吸收池易先倒置于干凈的吸水紙(如濾紙)上，待吸干、控凈殘留水后，再放回比色池的盒子內(nèi)。如吸收池光學(xué)窗面上沾附有水珠，只允許用鏡頭紙輕輕擦干。

(4)儀器工作數(shù)月后，要校正一下波長，用鐠釹濾光片校正。

(5)調(diào)換光源燈時，帶上手套，以防玷污燈的玻璃殼。

721型分光光度計波長的檢測與校正(鐠汝濾光片法)

1、在比色槽的光路上放一張小白紙，調(diào)節(jié)波長至580nm。

2、旋動光量T100%的旋鈕至最大，在小白紙上應(yīng)看到桔黃色的光斑

3、若光斑不是橘黃色，左右旋轉(zhuǎn)波長調(diào)節(jié)旋鈕使之出現(xiàn)橘黃色的光斑，粗略判斷波長偏離的程度，選擇檢測的起始波長。

4、調(diào)節(jié)波長至520nm，用蒸餾水或空氣調(diào)T“0”和T“100%”。

5、將鐠汝濾光片推入光路中，記錄T或A值，退出鐠汝濾光片。

6、調(diào)節(jié)波長至522nm, 用蒸餾水或空氣調(diào)T“0”和T“100%”

7、再將鐠汝濾光片推入光路中，記錄T或A值，退出鐠汝濾光片。

8、如此反復(fù)測定直至T值為最小或A值為最大，記錄此點的指示波長。

9、將指示波長減去鐠汝濾光片吸收波長(529nm)， 即得被校儀器的波長誤差。

10、如波長精度超出允許誤差60-600nm≤+3nm; 600 700≤+5nm; 700-800≤+8nm)，打開分光光度計左側(cè)調(diào)節(jié)窗口蓋板，用螺絲刀試調(diào)波長的調(diào)節(jié)桿。

11、試調(diào)波長的調(diào)節(jié)桿后，再按步驟3-8操作，直至分光光度計的波長精度誤差在其允許范圍內(nèi)即可。


文章（文字）來源：實驗圈。