（1）第一次劃線及每次劃線之前都要灼燒滅菌，劃線操作結束仍需灼燒接種環，每次灼燒目的總結如下表：

第一次劃線灼燒：避免接種環上可能存在的微生物污染培養基

第二次劃線之前灼燒：殺死上次劃線結束后接種環上殘留的菌種，使每次劃線的菌種來自上次劃線末端。

劃線結束：殺死接種環上殘留的菌種，避免污染環境和感染操作者。

（2）灼燒接種環之后，要冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。

（3）劃線時最后一區域不要與第一區域相連。

（4）劃線用力要大小適當，防止用力過大將培養基劃破。

（1）稀釋操作時：

每支試管及其中9mL水、移液管均需滅菌；操作時，試管口和移液管應在離火焰1－2cm處。

（2）涂布平板時：

①涂布器用70％酒精消毒，取出時，多余酒精在燒杯中滴盡，沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引燃。

②不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精。

③酒精燈與培養皿距離要合適，移液管頭不要接觸任何物體。