試驗(yàn)方法：以接種針挑取待試菌可疑菌落或純培養(yǎng)物，穿刺接種并涂布于斜面，置36±1℃培養(yǎng)18~24h，觀察結(jié)果。

　　三糖鐵瓊脂(TSI)成分：
　　蛋白胨 20.0g
　　牛肉膏　3.0g
　　乳 糖 10.0g
　　蔗　糖 10.0g
　　葡萄糖　1.0g
　　硫酸亞鐵銨(含6個(gè)結(jié)晶水) 0.5g
　　酚　紅 0.025g或5g/L溶液5mL
　　氯化鈉　　　　　　　　　　5.0g
　　硫代硫酸鈉　　　　　　　　0.5g
　　瓊　脂 12.0g
　　蒸餾水 1000.0mL
　　除酚紅和瓊脂外,將其他成分加入400mL蒸餾水中,攪拌均勻,靜置約10min,加熱煮沸至完全溶解,調(diào)至pH7.4±0.1。另將瓊脂加入600mL蒸餾水中,攪拌均勻,靜置約10min, 加熱煮沸至完全溶解。
　　將上述兩溶液混合均勻后,再加入酚紅指示劑,混勻,分裝試管(12mm×100mm),每管約2～4mL,高壓滅菌121℃ 10 min或115℃15 min,滅菌后置成高層斜面,呈桔紅色。

　　原理分析：本培養(yǎng)基適合于腸桿菌科的鑒定。用于觀察細(xì)菌對(duì)糖的利用和硫化氫（變黑）的產(chǎn)生。該培養(yǎng)基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例為10:10:1，只能利用葡萄糖的細(xì)菌，葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細(xì)菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面后來(lái)又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。

　　而發(fā)酵乳糖的細(xì)菌(e.coli)，則產(chǎn)生大量的酸，使整個(gè)培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃色。

　　如培養(yǎng)基接種后產(chǎn)生黑色沉淀，是因?yàn)槟承┘?xì)菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氫，硫化氫和培養(yǎng)基中的鐵鹽反應(yīng)，生成黑色的硫化亞鐵沉淀。

提問(wèn)：志賀氏菌都能分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，大多不發(fā)酵乳糖，不產(chǎn)生H2S。應(yīng)該產(chǎn)生什么現(xiàn)象？

　　　大腸桿菌，能分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，大多數(shù)能分解乳糖，不產(chǎn)生H2S。應(yīng)該是什么現(xiàn)象？

　　　沙門(mén)氏菌，能分解葡萄糖，不發(fā)酵乳糖，大多數(shù)產(chǎn)生H2S，多數(shù)產(chǎn)氣。

下面照片所示2-3-4，可能是大腸桿菌、沙門(mén)氏菌還是志賀氏菌？

答案：2－志賀氏菌　　3－沙門(mén)氏菌　　4－大腸桿菌