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食品中單增李斯特如何檢測?

已解決 懸賞分:0 提問時間 2008-12-26 13:47 - 解決時間 2008-12-26 21:17
食品中單增李斯特如何檢測?
2402 次關注     提問者: 藝藝  
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SN 0184-93 出口食品中單核細胞增生李斯特氏菌檢驗方法
Method for the examination of Listeria monocytogenes in food for export
樣品:冷凍樣品,2-5℃解凍,不超過18h
      若不能及時檢驗,應置于-15 ℃保存。
      非冷凍易腐樣品應盡可能及時檢驗。
      若不能及時檢驗,應置于4 ℃冰箱保存,在24h之內檢驗。
兩次增菌:
    巴氏消毒乳、乳制品、冷凍水產品、凍肉及其它加工食品應該前增菌。
    25g+225ml改良緩沖蛋白胨水,均質。
    30 ℃培養18-24h,移取1ml接種于100ml增菌培養液(EB)中,30 ℃培養24、48h,分別進行分離。
直接增菌:
    生乳、鮮肉以及未經加工處理過的樣品。
    25g+225ml 增菌培養液,30 ℃培養24和48h,分別進行分離。
分離:
劃線接種于MMA或者OXA平板,35 ℃培養24-48h。斜射光鏡檢。
OXA平板:菌落呈黑色,直徑1mm,在其周圍形成一個黑色環。
挑取5個可疑菌落,接種TSA-YE平板,進行純培養。
純化菌落再轉接到TSB-YE肉湯,35℃培養24h。
進行生化試驗。
典型運動鏡檢:
從TSA-YE平板挑取生長良好的菌落于潔凈載玻片上。用0.85%滅菌生理鹽水制成懸浮液。在顯微鏡下用油鏡觀察。短棒狀桿菌,顯微鏡下可見輕微旋轉和翻滾。
過氧化氫酶:過氧化氫酶又稱接觸酶,能催化過氧化氫分解成水和氧。
菌落-平板-1滴3%的過氧化氫。  陽性。
革蘭氏染色鏡檢: 革蘭氏陽性。
 
溶血試驗:
7%羊血瓊脂平板,劃分小格,刺種菌落。
做陽性對照和陰性對照(英諾克李斯特氏菌)。
35 ℃培養24-48h,于明亮處觀察。
單核細胞增生李斯特氏菌在刺種點產生窄小的透明β溶血環。
尿素酶(Urease)試驗:
有些細菌能產生尿素酶,將尿素分解、產生2個分子的氨,使培養基變為堿性,酚紅呈粉紅色。
穿刺接種尿素酶瓊脂斜面,35℃培養5天,逐日觀察,陰性。
硝酸鹽還原試驗:
某些細菌能夠 把培養基中的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽。
   亞硝酸鹽與乙酸反應生成亞硝酸。
   硝酸與對氨基苯磺酸作用,形成偶氮苯磺酸。
   偶氮苯磺酸與α萘氨結合,形成紅色的N- α苯氨偶氮苯磺酸
接種硝酸鹽肉湯,35℃培養5天,
加入0.2ml試劑A,再加入 0.2ml試劑B,輕搖混合。
紅色:陽性
沒有顏色變化:
        加入少量鋅粉
        -變紅-陰性(硝酸鹽未被還原)
        -不變-陽性(亞硝酸鹽已經分解成氨和氮)
三糖鐵(TSI)瓊脂試驗:
本試驗可同時觀察乳糖和蔗糖發酵產酸或產酸產氣(變黃);產生硫化氫(變黑)。葡萄糖被分解產酸可使斜面先變黃,但因量少,生成的少量酸,因接觸空氣而氧化,加之細菌利用培養基中含氮物質,生成堿性產物,故使斜面后來又變紅,底部由于是在厭氧狀態下,酸類不被氧化,所以仍保持黃色。
三糖鐵試驗:
接種三糖鐵瓊脂,35℃培養5天。
斜面和底層產酸,不產生硫化氫。
(發酵葡萄糖和蔗糖)
  回答者: nellyning   2008-12-26 21:17   


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