已解決
SN 0184-93 出口食品中單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢驗(yàn)方法
Method for the examination of Listeria monocytogenes in food for export
樣品：冷凍樣品，2－5℃解凍，不超過18h
若不能及時(shí)檢驗(yàn)，應(yīng)置于－15 ℃保存。
非冷凍易腐樣品應(yīng)盡可能及時(shí)檢驗(yàn)。
若不能及時(shí)檢驗(yàn)，應(yīng)置于4 ℃冰箱保存，在24h之內(nèi)檢驗(yàn)。
兩次增菌：
巴氏消毒乳、乳制品、冷凍水產(chǎn)品、凍肉及其它加工食品應(yīng)該前增菌。
25g＋225ml改良緩沖蛋白胨水，均質(zhì)。
30 ℃培養(yǎng)18－24h，移取1ml接種于100ml增菌培養(yǎng)液（EB)中，30 ℃培養(yǎng)24、48h，分別進(jìn)行分離。
直接增菌：
生乳、鮮肉以及未經(jīng)加工處理過的樣品。
25g＋225ml 增菌培養(yǎng)液，30 ℃培養(yǎng)24和48h，分別進(jìn)行分離。
Method for the examination of Listeria monocytogenes in food for export
樣品：冷凍樣品，2－5℃解凍，不超過18h
若不能及時(shí)檢驗(yàn)，應(yīng)置于－15 ℃保存。
非冷凍易腐樣品應(yīng)盡可能及時(shí)檢驗(yàn)。
若不能及時(shí)檢驗(yàn)，應(yīng)置于4 ℃冰箱保存，在24h之內(nèi)檢驗(yàn)。
兩次增菌：
巴氏消毒乳、乳制品、冷凍水產(chǎn)品、凍肉及其它加工食品應(yīng)該前增菌。
25g＋225ml改良緩沖蛋白胨水，均質(zhì)。
30 ℃培養(yǎng)18－24h，移取1ml接種于100ml增菌培養(yǎng)液（EB)中，30 ℃培養(yǎng)24、48h，分別進(jìn)行分離。
直接增菌：
生乳、鮮肉以及未經(jīng)加工處理過的樣品。
25g＋225ml 增菌培養(yǎng)液，30 ℃培養(yǎng)24和48h，分別進(jìn)行分離。
分離：
劃線接種于MMA或者OXA平板，35 ℃培養(yǎng)24－48h。斜射光鏡檢。
劃線接種于MMA或者OXA平板，35 ℃培養(yǎng)24－48h。斜射光鏡檢。
OXA平板：菌落呈黑色，直徑1mm，在其周圍形成一個黑色環(huán)。
挑取5個可疑菌落，接種TSA-YE平板，進(jìn)行純培養(yǎng)。
純化菌落再轉(zhuǎn)接到TSB-YE肉湯，35℃培養(yǎng)24h。
進(jìn)行生化試驗(yàn)。
典型運(yùn)動鏡檢：
從TSA-YE平板挑取生長良好的菌落于潔凈載玻片上。用0.85%滅菌生理鹽水制成懸浮液。在顯微鏡下用油鏡觀察。短棒狀桿菌，顯微鏡下可見輕微旋轉(zhuǎn)和翻滾。
純化菌落再轉(zhuǎn)接到TSB-YE肉湯，35℃培養(yǎng)24h。
進(jìn)行生化試驗(yàn)。
典型運(yùn)動鏡檢：
從TSA-YE平板挑取生長良好的菌落于潔凈載玻片上。用0.85%滅菌生理鹽水制成懸浮液。在顯微鏡下用油鏡觀察。短棒狀桿菌，顯微鏡下可見輕微旋轉(zhuǎn)和翻滾。
過氧化氫酶：過氧化氫酶又稱接觸酶，能催化過氧化氫分解成水和氧。
菌落－平板－1滴3％的過氧化氫。 陽性。
菌落－平板－1滴3％的過氧化氫。 陽性。
革蘭氏染色鏡檢： 革蘭氏陽性。
溶血試驗(yàn)：
7％羊血瓊脂平板，劃分小格，刺種菌落。
做陽性對照和陰性對照（英諾克李斯特氏菌）。
35 ℃培養(yǎng)24－48h，于明亮處觀察。
單核細(xì)胞增生李斯特氏菌在刺種點(diǎn)產(chǎn)生窄小的透明β溶血環(huán)。
7％羊血瓊脂平板，劃分小格，刺種菌落。
做陽性對照和陰性對照（英諾克李斯特氏菌）。
35 ℃培養(yǎng)24－48h，于明亮處觀察。
單核細(xì)胞增生李斯特氏菌在刺種點(diǎn)產(chǎn)生窄小的透明β溶血環(huán)。
尿素酶（Urease）試驗(yàn)：
有些細(xì)菌能產(chǎn)生尿素酶，將尿素分解、產(chǎn)生2個分子的氨，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，酚紅呈粉紅色。
穿刺接種尿素酶瓊脂斜面，35℃培養(yǎng)5天，逐日觀察，陰性。
有些細(xì)菌能產(chǎn)生尿素酶，將尿素分解、產(chǎn)生2個分子的氨，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，酚紅呈粉紅色。
穿刺接種尿素酶瓊脂斜面，35℃培養(yǎng)5天，逐日觀察，陰性。
硝酸鹽還原試驗(yàn)：
某些細(xì)菌能夠 把培養(yǎng)基中的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽。
亞硝酸鹽與乙酸反應(yīng)生成亞硝酸。
硝酸與對氨基苯磺酸作用，形成偶氮苯磺酸。
偶氮苯磺酸與α萘氨結(jié)合，形成紅色的N－ α苯氨偶氮苯磺酸
接種硝酸鹽肉湯，35℃培養(yǎng)5天，
加入0.2ml試劑A，再加入 0.2ml試劑B，輕搖混合。
紅色：陽性
沒有顏色變化：
加入少量鋅粉
－變紅－陰性（硝酸鹽未被還原）
－不變－陽性（亞硝酸鹽已經(jīng)分解成氨和氮）
某些細(xì)菌能夠 把培養(yǎng)基中的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽。
亞硝酸鹽與乙酸反應(yīng)生成亞硝酸。
硝酸與對氨基苯磺酸作用，形成偶氮苯磺酸。
偶氮苯磺酸與α萘氨結(jié)合，形成紅色的N－ α苯氨偶氮苯磺酸
接種硝酸鹽肉湯，35℃培養(yǎng)5天，
加入0.2ml試劑A，再加入 0.2ml試劑B，輕搖混合。
紅色：陽性
沒有顏色變化：
加入少量鋅粉
－變紅－陰性（硝酸鹽未被還原）
－不變－陽性（亞硝酸鹽已經(jīng)分解成氨和氮）
三糖鐵（TSI）瓊脂試驗(yàn)：
本試驗(yàn)可同時(shí)觀察乳糖和蔗糖發(fā)酵產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣（變黃）；產(chǎn)生硫化氫（變黑）。葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細(xì)菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面后來又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。
三糖鐵試驗(yàn)：
接種三糖鐵瓊脂，35℃培養(yǎng)5天。
斜面和底層產(chǎn)酸，不產(chǎn)生硫化氫。
(發(fā)酵葡萄糖和蔗糖）
本試驗(yàn)可同時(shí)觀察乳糖和蔗糖發(fā)酵產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣（變黃）；產(chǎn)生硫化氫（變黑）。葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細(xì)菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面后來又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。
三糖鐵試驗(yàn)：
接種三糖鐵瓊脂，35℃培養(yǎng)5天。
斜面和底層產(chǎn)酸，不產(chǎn)生硫化氫。
(發(fā)酵葡萄糖和蔗糖）