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微藻藻種的分離篩選技術(shù)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2005-10-17
    培養(yǎng)微藻,首先要從天然海水中分離出所需要的“單種”或“克隆”,如果在培養(yǎng)過(guò)程中,一旦發(fā)生雜藻污染或遭到蟲(chóng)害。必須重新進(jìn)行藻種的分離,以保證藻種具備“單種”或“克降”的特性。
  微藻培養(yǎng)者根據(jù)各自的經(jīng)驗(yàn)和習(xí)慣,創(chuàng)造了各式各樣的藻種分離篩選方法,已有十幾種之多。最常用的方法是微細(xì)吸管法、小水滴法和瓊脂平板法。
  微細(xì)吸管法最常用,是取得“單種”或“克隆”的最可靠的方法之一。但操作技術(shù)要求高,在顯微鏡下,先用豬眼瞼毛做成的解剖針,將水滴中雜物和不需要的藻細(xì)胞,撥向一邊,將所需的藻細(xì)胞撥向另一邊;對(duì)于有趨光性的鞭毛藻,可在一側(cè)投入光線,則所要選的鞭毛藻游向有光一側(cè),雜質(zhì)留在原處,這樣用玻璃微細(xì)吸管吸取所需的藻細(xì)胞就比較容易,另外,對(duì)個(gè)體較大的種類(lèi),可在雙筒解剖鏡下操作,將微細(xì)吸管內(nèi)的藻細(xì)胞輕輕吹入淺凹栽玻片上或栽玻片上的水滴中,為達(dá)到純培養(yǎng),微藻細(xì)胞最好經(jīng)數(shù)次洗滌,即吹入另一滴之后,再吸出吹入另一滴滅菌培養(yǎng)液水滴中,反復(fù)稱(chēng)出洗滌幾次,最后經(jīng)鏡檢確認(rèn)水滴中是要篩選的一個(gè)藻細(xì)胞之后,再接種試管中,或?qū)⒑性寮?xì)胞的一段毛細(xì)管用消毒鑷子夾斷,放入接種試管中。
  小水滴法比較方便易行,先將24乘24毫米的蓋玻片,用割針劑安瓿的小砂輪分割成8乘8毫米的9小塊,洗凈晾干,裝在培養(yǎng)皿中,干燥滅菌,把這些小塊玻片排列在滅菌的栽玻片上,在每塊小玻片上,滴一小滴含有微藻的水樣,水滴的大小,以在顯微鏡低倍鏡下能看清水滴的全部或大部分,稍稍移動(dòng)顯微鏡的栽物臺(tái),就能看清整個(gè)小水滴為度,發(fā)現(xiàn)小水滴中只有一個(gè)所要分離的藻細(xì)胞,無(wú)其他生物混雜時(shí),就可用消毒鑷子,將該玻片夾起來(lái),放進(jìn)裝有培養(yǎng)液的小試管中進(jìn)行培養(yǎng)。如果不是為了得到“克隆”,水滴中只要是同一種藻細(xì)胞,2-3個(gè)細(xì)胞成鏈也行,這樣更易使所需要的藻類(lèi)迅速生長(zhǎng)繁殖起來(lái)。
  瓊脂平板法對(duì)分離能運(yùn)動(dòng)的羽紋硅藻類(lèi)、鞭毛型綠藻類(lèi)最為適宜,方法易于掌握。這又可分為劃線接種法、噴霧接種法和小水滴擴(kuò)散法。現(xiàn)僅舉小水滴擴(kuò)散法為例。在制成的1-1.5%瓊脂,加熱攪拌,稍冷后分裝于培養(yǎng)皿中,厚3-5毫米,經(jīng)高壓滅菌,放冷)上,稀疏地滴上一些水樣小滴,放入培養(yǎng)箱中或北窗口下培養(yǎng),當(dāng)小淼貯存器的藻類(lèi)隨水滴的擴(kuò)散和藻類(lèi)自身的運(yùn)動(dòng),分散成單個(gè)個(gè)體,在某些方面平板的某一部位形成藻落,在顯微鏡下檢查確認(rèn)后,用消毒過(guò)的玻璃微針取下所需藻落,放入試管中培養(yǎng),反復(fù)幾次,就能得到純種培養(yǎng)物。





 
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