培養微藻,首先要從天然海水中分離出所需要的“單種”或“克隆”,如果在培養過程中,一旦發生雜藻污染或遭到蟲害。必須重新進行藻種的分離,以保證藻種具備“單種”或“克降”的特性。
微藻培養者根據各自的經驗和習慣,創造了各式各樣的藻種分離篩選方法,已有十幾種之多。最常用的方法是微細吸管法、小水滴法和瓊脂平板法。
微細吸管法最常用,是取得“單種”或“克隆”的最可靠的方法之一。但操作技術要求高,在顯微鏡下,先用豬眼瞼毛做成的解剖針,將水滴中雜物和不需要的藻細胞,撥向一邊,將所需的藻細胞撥向另一邊;對于有趨光性的鞭毛藻,可在一側投入光線,則所要選的鞭毛藻游向有光一側,雜質留在原處,這樣用玻璃微細吸管吸取所需的藻細胞就比較容易,另外,對個體較大的種類,可在雙筒解剖鏡下操作,將微細吸管內的藻細胞輕輕吹入淺凹栽玻片上或栽玻片上的水滴中,為達到純培養,微藻細胞最好經數次洗滌,即吹入另一滴之后,再吸出吹入另一滴滅菌培養液水滴中,反復稱出洗滌幾次,最后經鏡檢確認水滴中是要篩選的一個藻細胞之后,再接種試管中,或將含有藻細胞的一段毛細管用消毒鑷子夾斷,放入接種試管中。
小水滴法比較方便易行,先將24乘24毫米的蓋玻片,用割針劑安瓿的小砂輪分割成8乘8毫米的9小塊,洗凈晾干,裝在培養皿中,干燥滅菌,把這些小塊玻片排列在滅菌的栽玻片上,在每塊小玻片上,滴一小滴含有微藻的水樣,水滴的大小,以在顯微鏡低倍鏡下能看清水滴的全部或大部分,稍稍移動顯微鏡的栽物臺,就能看清整個小水滴為度,發現小水滴中只有一個所要分離的藻細胞,無其他生物混雜時,就可用消毒鑷子,將該玻片夾起來,放進裝有培養液的小試管中進行培養。如果不是為了得到“克隆”,水滴中只要是同一種藻細胞,2-3個細胞成鏈也行,這樣更易使所需要的藻類迅速生長繁殖起來。
瓊脂平板法對分離能運動的羽紋硅藻類、鞭毛型綠藻類最為適宜,方法易于掌握。這又可分為劃線接種法、噴霧接種法和小水滴擴散法。現僅舉小水滴擴散法為例。在制成的1-1.5%瓊脂,加熱攪拌,稍冷后分裝于培養皿中,厚3-5毫米,經高壓滅菌,放冷)上,稀疏地滴上一些水樣小滴,放入培養箱中或北窗口下培養,當小淼貯存器的藻類隨水滴的擴散和藻類自身的運動,分散成單個個體,在某些方面平板的某一部位形成藻落,在顯微鏡下檢查確認后,用消毒過的玻璃微針取下所需藻落,放入試管中培養,反復幾次,就能得到純種培養物。
微藻培養者根據各自的經驗和習慣,創造了各式各樣的藻種分離篩選方法,已有十幾種之多。最常用的方法是微細吸管法、小水滴法和瓊脂平板法。
微細吸管法最常用,是取得“單種”或“克隆”的最可靠的方法之一。但操作技術要求高,在顯微鏡下,先用豬眼瞼毛做成的解剖針,將水滴中雜物和不需要的藻細胞,撥向一邊,將所需的藻細胞撥向另一邊;對于有趨光性的鞭毛藻,可在一側投入光線,則所要選的鞭毛藻游向有光一側,雜質留在原處,這樣用玻璃微細吸管吸取所需的藻細胞就比較容易,另外,對個體較大的種類,可在雙筒解剖鏡下操作,將微細吸管內的藻細胞輕輕吹入淺凹栽玻片上或栽玻片上的水滴中,為達到純培養,微藻細胞最好經數次洗滌,即吹入另一滴之后,再吸出吹入另一滴滅菌培養液水滴中,反復稱出洗滌幾次,最后經鏡檢確認水滴中是要篩選的一個藻細胞之后,再接種試管中,或將含有藻細胞的一段毛細管用消毒鑷子夾斷,放入接種試管中。
小水滴法比較方便易行,先將24乘24毫米的蓋玻片,用割針劑安瓿的小砂輪分割成8乘8毫米的9小塊,洗凈晾干,裝在培養皿中,干燥滅菌,把這些小塊玻片排列在滅菌的栽玻片上,在每塊小玻片上,滴一小滴含有微藻的水樣,水滴的大小,以在顯微鏡低倍鏡下能看清水滴的全部或大部分,稍稍移動顯微鏡的栽物臺,就能看清整個小水滴為度,發現小水滴中只有一個所要分離的藻細胞,無其他生物混雜時,就可用消毒鑷子,將該玻片夾起來,放進裝有培養液的小試管中進行培養。如果不是為了得到“克隆”,水滴中只要是同一種藻細胞,2-3個細胞成鏈也行,這樣更易使所需要的藻類迅速生長繁殖起來。
瓊脂平板法對分離能運動的羽紋硅藻類、鞭毛型綠藻類最為適宜,方法易于掌握。這又可分為劃線接種法、噴霧接種法和小水滴擴散法。現僅舉小水滴擴散法為例。在制成的1-1.5%瓊脂,加熱攪拌,稍冷后分裝于培養皿中,厚3-5毫米,經高壓滅菌,放冷)上,稀疏地滴上一些水樣小滴,放入培養箱中或北窗口下培養,當小淼貯存器的藻類隨水滴的擴散和藻類自身的運動,分散成單個個體,在某些方面平板的某一部位形成藻落,在顯微鏡下檢查確認后,用消毒過的玻璃微針取下所需藻落,放入試管中培養,反復幾次,就能得到純種培養物。