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葡萄組織培養(yǎng)育苗

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2005-05-16
 一、葡萄嫩梢采集與消毒
     將大樹或扦插苗長出5—7片葉的嫩梢,取5—10厘米長,去掉幼葉。用自來水沖洗3—5分鐘,在70%酒精中浸泡30—40秒鐘,用蒸餾水沖洗2—3次,再放入0.5%氯化汞溶液中消毒7一10分鐘,最后用無菌水沖洗5—6次后備用。
 
二、培養(yǎng)基制作與篩選 
    (一)莖尖培養(yǎng)   方1   1/2ms培養(yǎng)基+6—芐基嘌呤(6—ba)0.5一lppm個荼乙酸(naa)0.01ppm+水解乳蛋白(lh)100ppm+蔗糖2%+瓊脂0.6%配制,氫離子濃度調到1585納摩/升[ph5.8)。在98.06千帕的壓力下,高壓滅菌20分鐘,冷涼待用。山東釀酒葡萄研究所用此方對白羽、紅香蕉、白友誼、雷司令等品種莖尖培養(yǎng)成活率達83.5%以上。
    方2   1/2ms培養(yǎng)基+赤霉素(ga)0.1ppm+吲哚乙酸(1ba)0.59pm+6-節(jié)基嘻吟lppm+激動素(kt)0.5ppm+硫酸腺嘌呤(ade)4ppm+瓊脂0.6%+蔗糖0.2%的培養(yǎng)基,對康拜爾芽變(康太)成活較好(遼寧省農科院植保所)。
 
    (二)莖葉分化培養(yǎng)    方1    1/2ms培養(yǎng)基+赤霉素1ppm+吲哚丁酸0.5ppm+6-節(jié)基膘吟1ppm+蔗糖2%+瓊脂0.6%,氫離子濃度調到1000納摩/升(ph6.0)。在98.06千帕高壓下滅菌20分鐘后備用。遼寧省農業(yè)科學院植保所對貝達、紅富土、黑奧林、巨峰品種族種成活率達90%以上。
    方2    用b5大量元素培養(yǎng)基+ms培養(yǎng)基其他元素+吲哚乙酸(1aa)0.01—0.1ppm+6-芐基嘌呤0.02—0.59pm+腺嘌呤(a)2;ppm或水解乳蛋白1000ppm+蔗糖2%—3%+瓊脂0.7%,氫離子濃度630.9—1585納摩/升(ph5.8—6.2),配好后裝入三角瓶中,用兩層硫酸紙封口,在98.06—117.67千帕的高壓鍋中滅菌20分鐘,冷涼待用。河南省園藝所用此配方對京早晶品種接種成活效果較好。
 
    (三)幼根分化培養(yǎng)    方1     用bs大量元素培養(yǎng)基+蔗糖4%+吲哚乙酸1ppm+6-芐基嘌呤0.08ppm+瓊脂7%,氫離子濃度1000納摩/升(ph6),經高壓滅菌20分鐘,冷涼備用。遼寧省農業(yè)科學院植保所用此配方對紅富士、黑奧林、巨峰等品種莖尖培養(yǎng)的單芽段,插入滅菌后的三角瓶培養(yǎng)基中,芽痕高于培養(yǎng)基面3.5毫米,每瓶插入1—3個莖段,插后在黑暗中培養(yǎng)48小時;再轉入間歇光照(兩支40瓦日光燈下,每天光照10小時)培養(yǎng),溫度保持在23—28℃,20天后幼根平均長分別為99.0,86.3,78.0毫米。
    方2     用1/2ms培養(yǎng)基+蔗糖4%+吲哚乙酸0.4ppm+6-芐基嘌呤0.06ppm+瓊脂7%,氫離子濃度1000納摩/升(ph6),經過高壓滅菌后接種貝達、紅宮土、黑奧林、臣蜂,20天后幼根平均長分別為94.0,36.5,16.8,50.8毫米。此培養(yǎng)基對貝達繁殖有較好效果(遼寧省農科院植保所)。
 
    三、接種(莖段試管培養(yǎng))    在超凈工作臺上,將徹底消毒過的備用嫩枝剪截2厘米核的單芽莖段,將其下部插入滅菌后的試管培養(yǎng)基中,芽痕高于培養(yǎng)基面3—5毫米,每管插1—3個莖段,在黑暗處培養(yǎng)48小時,再轉入間歇光照(兩支40瓦日光燈下,每天照10個小時)培養(yǎng),溫度保持在25—28℃,以后光照時間每天可延長12—14小時,光照強度為2000—2500勒。
 
    四、繼代培養(yǎng)    將試管苗剪成帶葉單芽段,不必消毒,插人培養(yǎng)基中,一般10一15天開始生根,30—35天可長成5.6片葉的小苗,在適宜條件下,1年可繁殖數萬株試管苗。
 
    五、煉苗移栽    試管苗長成后移到溫室或塑料大繃里,在自然光照下煉苗。要求溫度在20—25℃,經兩周后將試管塞揭開,使之接受自然光照、溫度、濕度鍛煉4—5天。用鑷子夾葉柄將小苗從培養(yǎng)基中取出,洗去培養(yǎng)基殘留物,直接栽入溫室或大棚中的小拱棚里的砂壤土或粗砂里,澆透底水。棚內濕度保持在90%左右。10厘米下的地溫應穩(wěn)定在15℃左右,光照為4000—5000勒。15—20天后見幼葉變綠時,即可移植到大田,成活率達80%以上。如棚內溫度過高,要通風和蓋葦簾遮蔭降溫,噴灑涼水,提高棚內空氣濕度和土壤濕度,以保持煉壯苗的適宜條件。
 
 
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