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細胞的傳代培養

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-08
一、原理
細胞在培養瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細胞能繼續生長,同時也將細胞數量擴大,就必須進行傳代(再培養)。
傳代培養也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以,而貼壁細胞需經消化后才能分瓶。
二、材料和試劑
1、細胞:貼壁細胞株
2、試劑:0.25%胰酶、1640培養基(含10%小牛血清)
3、儀器和器材:倒置顯微鏡,培養箱、培養瓶、吸管、廢液缸等
三、操作步驟
1、將長滿細胞的培養瓶中原來的培養液棄去。
2、加入0.5—1ml 0.25%胰酶溶液,使瓶底細胞都浸入溶液中。
3、瓶口塞好橡皮塞,放在倒置鏡下觀察細胞。隨著時間的推移,原貼壁的細胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時將胰酶棄去,加入10ml培養液終止消化。
觀察消化也可以用肉眼,當見到瓶底發白并出現細針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1—3分鐘。
4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液,分到另外兩到三瓶中,實踐培養液塞好橡皮塞,置37℃下繼續培養。第二天觀察貼壁生長情況。
附:消化液配制方法:
稱取0.25克胰酶蛋白酶(活力為1:250),加入100ml無Ca2 、Mg2 的Hank’s液溶解,濾器過濾除菌,4℃保存,用前可在37℃下回溫。
胰酶溶液中也可加入EDTA,使最終濃度達0.02%。
 
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