細(xì)胞的組織化學(xué)方法，是研究細(xì)胞成分常用的方法之一。它是利用化學(xué)試劑與細(xì)胞內(nèi)的某些物質(zhì)進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，從而在細(xì)胞局部形成有色沉淀物，再通過顯微鏡對組織內(nèi)的生物化學(xué)成分進(jìn)行定性、定位、定量研究。
一、Brachet反應(yīng)一顯示細(xì)胞內(nèi)的DNA和RNA
(一)原理
細(xì)胞經(jīng)甲基綠一呱咯寧混合液處理后，其中的DNA和RNA出現(xiàn)不同的呈色反應(yīng)，一般認(rèn)為這是由于帶有負(fù)電荷的核酸對堿性染料呱咯寧和甲基綠具有親和力，且這兩種染料的作用有選擇性，甲基綠染高聚分子的DNA呈藍(lán)綠色，呱咯寧染低聚分子的RNA呈紅色。由此對細(xì)胞中的DNA和RNA進(jìn)行定位、定性、和定量分析。
(二)方法
l．接種Hela細(xì)胞于蓋片上并培養(yǎng)24～48小時，使長成單層。
2．取出蓋片，用PBS(pH7.2)輕輕沖洗蓋片表面去除殘?jiān)?br />3．放入Carnoy固定液中固定l小時。
4．浸入甲基綠一呱咯寧醋酸緩沖液中30分鐘染色。
5．取出蓋片放入蒸餾水中輕輕漂洗2～3次(2～3秒鐘左右)，吸去水分。放入純丙酮中分色2～3秒鐘。
6. 放入l／2丙酮 1／2二甲苯中5秒鐘。
7．放入純二甲苯中透明5分鐘。
8．滴一滴中性樹膠于載玻片上，將蓋片標(biāo)本面朝下封片。
9．鏡下觀察
（三）結(jié)果
細(xì)胞質(zhì)被染成淺紅色，細(xì)胞核被染成藍(lán)綠色，而其中核仁被染成紫紅色。
二、細(xì)胞內(nèi)堿性蛋白和酸性蛋白的顯示
（一）原理
由于不同的蛋白質(zhì)分子所帶的堿性和酸性基團(tuán)的數(shù)目不同，在pH值不同的溶液中，蛋白質(zhì)分子所帶的凈電荷多少不同。如在生理?xiàng)l件下，整個蛋白質(zhì)所帶負(fù)電荷多，則為酸性蛋白質(zhì)；帶正電荷多，則為堿性蛋白質(zhì)。據(jù)此，可將標(biāo)本經(jīng)三氯醋酸處理提出核酸后，用不同pH值的固綠染液分別染色，細(xì)胞內(nèi)的酸性蛋白和堿性蛋白質(zhì)顯示出來。
（二）方法
1．以破壞脊髓法處死蟾蜍，將其腹面向上放人蠟盤中，剪開胸腔，打開心包。小心將心臟剪一小口，取心臟血一滴滴在干凈載玻片一端，推片，按此法制備二張血涂片，室溫晾干。
2. 將涂片作好標(biāo)記放在70％乙醇中固定5分鐘，室溫晾干。
3．放入5％三氯醋酸中60℃30分鐘，抽提出核酸。
4．清水沖洗多次（3分鐘以上），以沖去痕跡的三氯醋酸。
5．濾紙吸干玻片上水分。
6. 一張片放入0.1％堿性固綠(pH8.0～8.5)中染色10～15分鐘,另一張片放入0.1％酸性固綠(pH2.0～2.5)染色5～10分鐘。
7．清水沖洗，蓋上蓋片鏡檢。
（三）結(jié)果
經(jīng)堿性固綠染色片中，胞質(zhì)、核仁不著色，細(xì)胞核大部分被染成綠色，是為堿性蛋白質(zhì)存在處。經(jīng)酸性固綠染色片中，因胞質(zhì)和核仁中有酸性蛋白，被染成綠色。
三、細(xì)胞內(nèi)過氧化物酶的顯示
（一）原理
過氧化物酶能把許多胺類氧化為有色化合物，用聯(lián)苯胺處理標(biāo)本，細(xì)胞內(nèi)的過氧化物酶能把聯(lián)苯胺氧化為藍(lán)色的聯(lián)苯胺藍(lán)，進(jìn)而變?yōu)樽厣a(chǎn)物，因而可以根據(jù)顏色反應(yīng)來判定過氧化物酶的有無或多少。
（二）方法
1．取小鼠一只，以頸椎脫位法將其處死，迅速剖開其后肢暴露出股骨，將股骨一端斜向剪斷，用PBS緩沖液濕潤過的注射器針頭吸出骨髓一滴滴到載玻片上。
2．推片，室溫晾干。
3．將涂片放入0.5％硫酸銅中浸30秒~1分鐘。
4．取出涂片直接放入聯(lián)苯胺混合液中反應(yīng)6分鐘。
5．清水沖洗，放入1％番紅溶液中復(fù)染2分鐘。
6．清水沖洗，室溫晾干。
7．鏡檢或封片后鏡檢。
（三）結(jié)果
涂片中可見一些細(xì)胞中存在著藍(lán)色或棕色顆粒，為過氧化物酶所在位置。
四、過碘酸雪夫反應(yīng)(PAS)——顯示細(xì)胞內(nèi)糖原
(一)原理
組織、細(xì)胞的多糖、粘多糖及粘蛋白等都可用PAS法來顯示，其化學(xué)基礎(chǔ)是利用過碘酸的氧化作用，打開碳鏈形成醛，生成的醛基與Schiff試劑中的無色品紅反應(yīng)形成紫紅色化合物。
(二)方法
l．取l~2mm厚的肝組織塊，用Carnoy氏液4℃固定4～6小時。
2．乙醇脫水、二甲苯透明。石蠟包埋，切片。
3．用70％乙醇展片。
4．脫蠟：二甲苯(1)5分鐘→二甲苯(2)5分鐘→100％乙醇5分鐘→含1％火棉膠的乙醇液1分鐘→70％乙醇1分鐘。
5．直接浸入過碘酸酒精液反應(yīng)5～15分鐘，經(jīng)70％乙醇洗片刻。
6．浸入Schiff氏酒精液反應(yīng)15分鐘。
7．亞硫酸水洗三次，以洗去多余的非特異性結(jié)合的色素，以及擴(kuò)散的染料。
8．流水沖洗3～5分鐘。
9．蒸餾水洗。
10．浸入Ehrlich蘇木精復(fù)染20~30秒，使細(xì)胞核著色。
11．脫水：95％乙醇3分鐘二次→100％乙醇3分鐘二次→二甲苯透明10分鐘二次。
12．加蓋片鏡檢或樹膠封固后鏡檢。
(三)結(jié)果
細(xì)胞中呈紫紅的顆粒即為糖原。