1.細胞收集:懸浮細胞直接收集10ml的離心管中,而帖壁細胞先用滴管輕輕吹打,調(diào)亡細胞一經(jīng)吹打可能脫壁,收集到10ml的離心管中,沒脫壁的細胞用0.02%的EDTA消化使之脫壁,每樣本細胞數(shù)為(1~5)×106,500~1000r/min離心5min棄去培養(yǎng)液。
2.用孵育緩沖液洗1次,500~1000r/min離心5min。
3.用100μl的標記溶液重懸細胞,室溫下避光孵育10~15min。
4.500~1000r/min離心5min沉淀細胞,孵育緩沖液洗1次。
5.加入熒光溶液4℃下孵育20min,避光并不時振動。
2.用孵育緩沖液洗1次,500~1000r/min離心5min。
3.用100μl的標記溶液重懸細胞,室溫下避光孵育10~15min。
4.500~1000r/min離心5min沉淀細胞,孵育緩沖液洗1次。
5.加入熒光溶液4℃下孵育20min,避光并不時振動。