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BrdU標記法檢測細胞增殖

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-08

1.細胞以1.5×105/ml細胞數接種于直徑35ml培養皿中(內放置一蓋玻片),培養1天,用含0.4% FCS培養液同步化3天,使絕大多數細胞處于G0期。

2.終止細胞培養前,加入BrdU(終濃度為30μg/L),37℃,孵育40min。

3.棄培養液,玻片用PBS洗滌3次。

4.甲醇/醋酸固定10min。

5.經固定的玻片空氣干燥,0.3%H2O2-甲醇30min滅活內源性氧化酶。

6.5%正常兔血清封閉。

7.甲酰胺100℃,5min變性核酸。

8.冰浴冷卻后PBS洗滌,加1抗即抗小鼠BrdU單抗(工作濃度1:50),陰性對照加PBS或血清。

9.按ABC法進行檢測,蘇木素或伊紅襯染,在顯微鏡下隨機計數10個高倍視野中細胞總數及BrdU陽性細胞數,計算標記指數(LI)。


 
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