⑴?臍帶收集:用無菌止血鉗夾閉臍帶兩端,在止血鉗外側剪斷臍帶,放入盛有4℃Cord Buffer的飯盒內。臍帶在4℃放置不應超過24小時。
⑵ 臍帶內皮細胞分離
帶無菌手套,取出臍帶,在止血鉗內側用碘酒和酒精棉球消毒后,用無菌剪刀將兩端臍帶剪除。
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在臍帶一端找到靜脈,插入臍帶靜脈插管,用2根粗絲線扎牢,用Cord Buffer抽吸有的30ml注射器沖洗靜脈腔,至將臍血洗凈。
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趕出靜脈腔內殘余液體,將臍帶另一端用止血鉗夾閉,用10ml注射器連接針頭,注入37℃預熱的0.1%膠原酶約6-8ml,放入37℃Cord Buffer中保溫6-10min
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吸出靜脈腔內膠原酶所消化的細胞懸液,加入預加有20mlcordBuffer的離心管中,沖洗靜脈腔,一并加入離心管中。
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離心,1500rpm,10min棄上清,用5~7ml 20%FCS,RPMT 1640重懸細胞,轉入培養瓶,放5%CO2孵箱
⑵ 臍帶內皮細胞分離
帶無菌手套,取出臍帶,在止血鉗內側用碘酒和酒精棉球消毒后,用無菌剪刀將兩端臍帶剪除。
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在臍帶一端找到靜脈,插入臍帶靜脈插管,用2根粗絲線扎牢,用Cord Buffer抽吸有的30ml注射器沖洗靜脈腔,至將臍血洗凈。
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趕出靜脈腔內殘余液體,將臍帶另一端用止血鉗夾閉,用10ml注射器連接針頭,注入37℃預熱的0.1%膠原酶約6-8ml,放入37℃Cord Buffer中保溫6-10min
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吸出靜脈腔內膠原酶所消化的細胞懸液,加入預加有20mlcordBuffer的離心管中,沖洗靜脈腔,一并加入離心管中。
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離心,1500rpm,10min棄上清,用5~7ml 20%FCS,RPMT 1640重懸細胞,轉入培養瓶,放5%CO2孵箱