1. 剪切:把組織小塊置于小燒杯或青霉素小瓶中,用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污,吸靜Hanks液,用眼科剪反復(fù)剪切1mm3塊為止。
2. 擺布:用彎頭吸管吸取若干小塊,置于培養(yǎng)瓶中,用吸管彎頭把組織小塊擺布在培養(yǎng)瓶底部,小塊相互距離以0.5cm為宜,每一25ml培養(yǎng)瓶底可擺布20~30塊。
3. 輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,另瓶底向上,注意翻瓶時勿另組織小塊流動,塞好瓶塞,置36.5℃溫箱培養(yǎng)2小時左右(勿超過4小時),使小塊微干涸。
4. 培養(yǎng):從微箱中取出培養(yǎng)瓶,開塞,46度斜持培養(yǎng)瓶,箱瓶底腳部輕輕注入培養(yǎng)液少許,然后緩緩再把培養(yǎng)瓶翻轉(zhuǎn)過來,讓培養(yǎng)液慢慢覆蓋附于瓶地上的組織小塊。置溫箱中靜止培養(yǎng)。待細(xì)胞從組織塊游出數(shù)量增多后。再補(bǔ)加培養(yǎng)液。