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MTT檢測細(xì)胞生長

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-08

1.取96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,每孔中加0.1ml含2×104~10×104靶細(xì)胞的培養(yǎng)液(含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液),在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2~3小時(shí)讓細(xì)胞帖壁(如果是懸浮細(xì)胞可直接進(jìn)行下一步)

2.用RPMI-1640培養(yǎng)液2~10倍遞次稀釋細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品,根據(jù)情況2~5倍遞次稀釋待檢樣品,每孔加0.1ml稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品和待檢樣品,每個(gè)稀釋度3個(gè)重復(fù)孔。對照孔6個(gè):3個(gè)陽性對照孔,每孔加0.1ml含大劑量細(xì)胞因子的RPMI-1640培養(yǎng)液,3個(gè)陰性對照孔,每孔加0.1ml RPMI-1640培養(yǎng)液。在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24~48小時(shí)或預(yù)定的時(shí)間。

3.吸去培養(yǎng)液,用PBS洗滌一次(如為懸浮細(xì)胞,應(yīng)在吸去上清液前離心培養(yǎng)板)。

4.每孔加0.1ml PBS和10μl MTT染液,在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4~6小時(shí)。

5.每孔加0.1ml酸化異丙醇,也可用含10% SDS的10mmol/L HCl代替酸化異丙醇,在振蕩器上振蕩混勻,讓還原產(chǎn)物充分溶解。置酶聯(lián)檢測儀上測定光密度(OD)值,檢測波長570nm,參考波長630nm。以O(shè)D值對樣品稀釋度作圖,比較標(biāo)準(zhǔn)曲線和待測樣品曲線即可求得待測樣品中細(xì)胞因子的含量。


 
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