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流式細胞計PI染色死細胞

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-08

PI能夠插入雙鏈DNA中。它被活細胞排斥但能穿透正在死亡或已經死亡的細胞的細胞膜。

Ⅰ、材料

1、PI(e.g.,Cat #537059,Calbiochem,San Diego,CA)

2、緩沖體系:1×PBS(Ca2 and Mg2 free,e.g.,Cat#9240,Irvine Scientific,Santa Ana,CA) 2%新鮮小牛血清+0.1%疊氮鈉

A、 PI緩沖液

用緩沖液將PI溶解至終濃度為1mg/ml中,于4℃下密封避光保存1個月。

B、 PI濃縮液

用緩沖液將PI溶解至終濃度為500mg/ml,于4℃下密封避光保存。我們已經檢測過將PI濃縮液放置數月后,并無觀察到染色活性的丟失。

Ⅱ、方法:

將樣品細胞按程序描述的方法用FITC標記的單克隆抗體進行單色染色。

A、 在最后的洗滌步驟后,將樣品細胞懸浮于PI緩沖液中,于4℃下密封避光保存以備通過流式細胞儀分析;

B、 在最后的洗滌步驟后,如前述將樣品細胞懸浮后備用。如果您想檢測樣品細胞活力,在每一管中加入2μl的PI濃縮液,混勻。將樣品置于4℃下密封避光保存以備流式細胞儀分析。

注意:此法并不適用于甲醛固定的樣品。在根據Sasaki等人的方法(Cytometry 8:413,1987)用PE標記的抗體對樣品進行染色時可以適用此方法。然而,由于PI和PE的發射光譜的廣泛交迭,因此本方法適于用7-氨基-放線菌素D將死細胞加以區分。

 
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