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熒光檢測CMC

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-08

1.用含10%小牛血清和抗生素的RPMI-1640培養液將K562細胞配成1×105/ml濃度。用同樣培養液將PBMC配成1×106/ml濃度。

2.取96孔圓底細胞培養板,每孔加0.1ml K562細胞懸液;每孔加適量PBMC使效靶比為1:1~5:1,每種處理3個復孔;3個對照孔只加效應細胞;8個對照孔只加靶細胞;4個對照孔只加細胞培養液。每孔加20μl Alamar Blue;每孔總量為0.2ml。

3.在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養24小時。

4.直接在熒光檢測儀上檢測熒光強度,激發波長530nm,發射波長590nm。各孔熒光強度值應減去培養液對照熒光強度的平均值,各復孔熒光強度的平均值記為AF。按下式計算特異性殺傷百分比:

特異性殺傷(%)=100×[AF靶細胞對照-(AF實驗孔-AF效應細胞對照)]/AF靶細胞對照


 
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