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腎小球分離與移植培養

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-08
SD大鼠頸椎脫臼法處死,75%乙醇浸泡1~2分鐘,2次,置超凈臺內,打開腹腔取出腎臟剪碎,置含Hank’s液的無菌培養皿洗滌,置80目不銹鋼篩網上。用扁平自制小鏟輕輕碾磨產物微小組織透過篩網,濾過組織Hank’s液混合物用吸管吸至120目不銹鋼篩網,濾過,去小組織塊,濾過物吸至200目不銹鋼篩網,輕輕濾過,Hank’s液洗滌1次,收集網上腎小球,鏡下觀察為分離良好的腎小球。腎小球用0.2%胰酶、0.1%膠原酶,37℃消化20分鐘,加血清終止胰酶反應,離心除去膠原酶。處理過的腎小球計數后接種至24孔培養板或25ml培養瓶,使腎小球大于60個/cm2,加培養基5~10ml(培養基組成:F12—3T3上清1:1;5%馬血清;2.5%胎牛血清;胰島素5μg/ml;25ng/ml氫化可的松;5μg/ml轉鐵蛋白;25ng/ml前列腺素E1;甲狀腺素0.02ng/ml;D-纈氨酸150ng/ml)腎小球培養8~10天,去除腎小球未生長組分,細胞繼續培養24小時,形態學觀察:細胞生長成單層多角型細胞,直徑約100μm。
 
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