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腫瘤細胞培養方法簡介

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-08

一、機械刮除法

1.標記:鏡下觀察,用不脫色筆在培養瓶皿的背面圈下生長腫瘤細胞的部位。
2.刮除:棄掉培養液,把無菌膠刮伸入瓶皿中,肉眼或顯微鏡窺視下,刮除無標記空間。
3.用Hanks液沖洗一兩次,洗除被刮掉的細胞。
4.注入培養液繼續培養,如發現仍有成纖維細胞殘留,可重復刮除至完全除掉為止。


二、反復帖壁法

1.待細胞生長達一定數量后,倒出舊培養液,用胰酶消化后,Hanks沖洗2次,加入不含血清的培養液,吹打制成細胞懸液。
2.取編號為A、B、C三個培養瓶。首先把懸液接種入A培養瓶中,置溫箱中靜止培養5~20分鐘后,輕輕傾斜培養瓶,讓液體集中瓶角后慢慢吸出全部培養液,再接種入B培養瓶中后,向A瓶中補充少許完全培養液置溫箱中繼續培養。
3.培養B瓶中細胞5~20分鐘后,按處理A的方法,把培養液注入C培養瓶中,再向B瓶補加完全培養基。

三、消化排除法

1.先是用0.5%胰蛋白酶和0.02%EDTA(1:1)混合液漂洗培養基細胞一次,然后再換成新的混合繼續消化,并在倒置顯微鏡下窺視和不時搖動培養瓶,到半數細胞脫落下來后,便立即停止消化。
2.把消化液吸入離心管中,離心去上清,吸入另瓶中,加培養液置溫箱中培養,向原瓶內也補加新的培養液繼續培養。用此法處理后,成纖維細胞比腫瘤細胞易先脫落,經過幾次反復處理,可能把成纖維細胞除凈。

四、膠原酶消化法

1.可用0.5mg/ml的膠原酶消化處理,邊消化邊在倒置顯微鏡下窺視,當發現成纖維細胞被除掉后,即終止消化。
2.用Hanks洗滌處理一次后,更換新培養液,繼續培養,可獲純凈腫瘤細胞。如成纖維細胞未被除凈,可再次重復。

 
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