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MTT測定CMC

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-08

1. Fen細胞培養于含10%小牛血清的RPMI-1640培養液中,在25cm2培養瓶中生長到接近匯合。用含0.05%胰蛋白酶,0.02% EDTA的PBS消化細胞5分鐘,洗滌后,用細胞培養液將細胞配成1×105/ml。

2. 取96孔細胞培養板,每孔加0.1ml細胞懸液,在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培 養箱中培養24小時,讓細胞帖壁。每孔加0.1ml效應細胞懸液,效靶比10:1到50:1,繼續培養4小時,讓效應細胞發揮殺傷效應。實驗中,設立只有靶細胞的無殺傷對照和只有 效應細胞的陰性對照,每種處理設3各復孔。

3. 用含2%小牛血清的RPMI-1640培養液洗滌各孔 3次,洗去不粘附的細胞。每孔加 0.1ml含2%小牛血清的RPMI-1640培養液和10μl 5mg/ml的MTT染液,繼續培養3小時。

4. 用PBS洗滌2次,每孔加0.1ml含0.04mol/L HCl的異丙醇,室溫30分鐘,溶解形成的結晶。在570nm波長處,用酶聯檢測儀檢測各孔的光吸收值(OD)。

殺傷活性(%)=(OD實驗孔-OD陰性對照) /OD無殺傷對照× 100


 
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