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原代細胞培養(yǎng)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-08

(一)原理
細胞培養(yǎng)(Cell culture)是模擬機體內(nèi)生理條件,將細胞從機體中取出,在人工條件下使其生存、生長、繁殖和傳代,進行細胞生命過程、細胞癌變、細胞工程等問題的研究。近年來,廣泛地應(yīng)用于分子生物學、遺傳學、免疫學、腫瘤學、細胞工程等領(lǐng)域,發(fā)展成一種重要生物技術(shù),并取得顯著成就。由體內(nèi)直接取出組織或細胞進行培養(yǎng)叫原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)細胞離體時間短,性狀與體內(nèi)相似,適用于研究。一般說來,幼稚狀態(tài)的組織和細胞,如:動物的胚胎、幼仔的臟器等更容易進行原代培養(yǎng)。
(二)操作
1.取材
用頸椎脫位法使乳兔迅速死亡。然后,把整個動物浸入盛有75%乙醇的燒杯中數(shù)秒鐘消毒,取出后放在大平皿中攜入超凈臺。用消過毒的剪刀剪開用碘酒和乙醇再次消毒后的皮膚,剖腹取出肝臟或腎臟。置于無菌平皿中。
2.切割
用滅菌的PBS液將取出的臟器清洗三次,然后用眼科手術(shù)剪刀仔細將組織反復(fù)剪碎,直到成1mm3左右的小塊,再用PBS清洗,洗到組織塊發(fā)白為止。移入無菌離心管中,靜置數(shù)分鐘,使組織塊自然沉淀到管底,棄去上清。
3.消化、接種培養(yǎng)
吸取0.25%胰蛋白酶一0.02%EDTA混合消化液1ml,加入離心管中,與組織塊混勻后,加上管口塞子,37℃水浴中消化8~10分鐘,每隔幾分鐘搖動一下試管,使組織與消化液充分接觸,靜止,吸去上清,向離心管中加入5~10ml含5%小牛血清的MEM培養(yǎng)基,用吸管吹打混勻,移入二個培養(yǎng)瓶中,置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
(三)結(jié)果
細胞接種后一般幾小時內(nèi)就能貼壁,并開始生長,如接種的細胞密度適宜,5天到一周即可形成單層。

 

 
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